【摘 要】
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[目的]获得adipophilin通过n CEH促使细胞内脂质积聚的可靠证据,阐明adipophilin通过n CEH促使细胞内脂质积聚的机制,为动脉粥样硬化的防治寻找新靶点。[方法]将adipophilin
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[目的]获得adipophilin通过n CEH促使细胞内脂质积聚的可靠证据,阐明adipophilin通过n CEH促使细胞内脂质积聚的机制,为动脉粥样硬化的防治寻找新靶点。[方法]将adipophilin沉默表达和稳定高表达的逆转录病毒质粒载体转染PA317包装细胞,收集病毒,感染RAW264.7细胞,筛选,制备高和沉默表达adipophilin的细胞。在高和沉默表达adipophilin的RAW264.7细胞中,分别用RT-PCR和Western blot检测n CEH的m RNA和蛋白表达的变化;高效液相色谱法检测细胞内胆固醇酯的含量。在高表达adipophilin的RAW264.7细胞中,用PKCδ激动剂0.1μmol/L PMA预孵育30 min后,或者用PKCδ特异性抑制剂0.1μmol/L Rottlerin预孵育30 min后,分别用RT-PCR和Western blot检测n CEH的m RNA水平和蛋白表达的改变;高效液相色谱法来检测细胞内胆固醇酯含量。[结果]在高表达adipophilin的RAW264.7细胞中,胆固醇酯的含量明显增加,在沉默表达adipophilin的RAW264.7细胞中,胆固醇酯的含量显著减少;同时,adipophilin能够抑制n CEH m RNA和蛋白的表达;在高表达adipophilin的RAW264.7细胞中,用PKCδ激动剂0.1μmol/L PMA预孵育30 min后,n CEH的m RNA与蛋白表达水平明显降低,用PKCδ特异性抑制剂0.1μmol/L Rottlerin预孵育30 min后,n CEH的m RNA和蛋白表达水平显著增高。[结论]高表达adipophilin促进巨噬细胞内胆固醇酯的蓄积,抑制n CEH m RNA和蛋的表达;adipophilin通过PKCδ抑制n CEH促进巨噬细胞内脂质蓄积。
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