【摘 要】
：
心脏病是死亡率最高的疾病,其中先天性心脏病（先心病）在我国出生缺陷病例中占到26.7%,且呈逐年上升趋势。研究表明,心脏发育基因的突变与表达异常以及环境影响均可能造成心脏发育异常,发展为先心病,而环境影响导致的先心病也是通过诱发基因突变或表达异常造成的,因此,对心脏发育基因的研究尤为重要。Mpr5基因是本实验室筛选鉴定的一个与心脏发育有关的候选基因,前期已利用CRISPR/Cas9技术在斑马鱼中建
论文部分内容阅读
心脏病是死亡率最高的疾病,其中先天性心脏病（先心病）在我国出生缺陷病例中占到26.7%,且呈逐年上升趋势。研究表明,心脏发育基因的突变与表达异常以及环境影响均可能造成心脏发育异常,发展为先心病,而环境影响导致的先心病也是通过诱发基因突变或表达异常造成的,因此,对心脏发育基因的研究尤为重要。Mpr5基因是本实验室筛选鉴定的一个与心脏发育有关的候选基因,前期已利用CRISPR/Cas9技术在斑马鱼中建立了Mpr5基因敲除系。在此基础上,本研究对Mpr5基因敲除系的其中一个亚系（缺失8 bp）进行了突变表型的鉴定及其相关功能的初步分析,主要研究内容如下:1.首先利用变性聚丙烯酰酸胺凝胶电泳鉴定筛选出稳定纯合的Mpr5-/-亚系,通过与野生型（WT）斑马鱼对比统计分析其死亡率和畸形率,发现其死亡率在12 h达到最高（34.24%）,这说明Mpr5敲除亚系纯合子斑马鱼早期畸形胚胎多数不易成活。通过对48 h畸形胚胎的观察,发现其畸形主要为心脏形态异常:线性化心管（25.15%）以及心包过大（22.63%）,说明Mpr5基因对心脏形态结构的发育是必需的。2.为了探究Mpr5基因在影响心脏形态发育时是否对心功能产生了影响,将Mpr5-/-亚系畸形胚胎置于高速成像显微镜下录制20 s心脏跳动的视频,SOHA分析其结果表明:Mpr5-/-畸形胚胎较WT胚胎,平均心率由145.50±205.63次/min降低为88.27±411.38次/min、心动周期由0.4304±0.0030 s延长到0.7451±0.0474 s、收缩期表面积由43986±18467μm~2降低为29205±9218μm~2、舒张期表面积由25946±12679μm~2降低为24269±27265μm~2以及收缩与舒张心脏腔室表面积变化率由0.40±0.03增加为0.48±0.02,且差异均有统计显著性,进一步表明Mpr5基因影响斑马鱼的心功能。3.通过SOHA软件进行M-Mode分析:Mpr5-/-与WT相比舒张间隔与收缩期间隔的不规律性增加,且相比WT收缩期间隔与舒张期间隔都有所上升。SOHA软件模拟人类心率曲线得出的结果中Mpr5-/-心肌收缩力确有下降,且心率不齐。因而推测,Mpr5-/-心脏畸形主要影响了心肌功能,导致心脏收缩期与舒张期增加和心率不齐。4.为了研究Mpr5基因具体是怎样调控心脏发育的,本文选取了与早期心脏发育相关的基因进行q PCR分析,研究结果发现在24 hpf的Mpr5-/-斑马鱼胚胎中,Nkx2.5、Gata4、Mef2c、Tbx1、Fgf8、Fgf10、Smyd1a、Hand2与Smyd1b表达均下降且有统计显著性,Foxa2和Tbx20表达则有所上升有统计显著性,而Isl1结果没有统计显著性。说明敲除Mpr5可能对早期心脏发育相关信号通路产生了一定的影响,其具体路径中的基因相互作用有待进一步研究。5.已知Foxp4调控心脏的形成,本实验室前期发现Mpr5可能调控Foxp4的表达。本文利用q PCR实验所得结果显示:在24 hpf的Mpr5-/-斑马鱼胚胎中,Foxp4的表达量有所下降,且具有统计显著性,表明Mpr5调控Foxp4的表达。然后利用双荧光报告酶系统探讨Mpr5对Foxp4可能具有的转录调控作用,发现转染过表达Mpr5质粒与质粒p GL3-Foxp4（-3219～+175 bp）的双荧光素酶活性增强,表明Mpr5激活Foxp4基因启动子的转录活性,而转染过表达Mpr5质粒与Foxp4启动子亚克隆质粒p GL3-F1（-2719～+175 bp）的双荧光素酶活性受到抑制。利用生物信息学分析Foxp4基因启动子上游-3219～+175 bp内含有2个Mpr5结合位置（Z-Motif-1和Z-Motif-2）,可能具有转录激活作用。进一步的Ch IP实验为Mpr5可能结合在这个预测的Foxp4基因启动子特定区域提供了实验证据。综上所述,本文主要对斑马鱼Mpr5基因敲除亚系的突变表型进行了鉴定和基因功能的初步分析。实验证明Mpr5基因对心脏形态发育起着重要的调控作用,并对心功能产生了影响。Mpr5调控早期心脏发育基因的转录表达,其中,可能通过结合在Foxp4基因启动子上调控Foxp4的转录。
其他文献
染料废水具有毒害作用且可生化性较差,因此当染料废水进入自然环境中,因无法被微生物完全降解造成大量的水体污染。基于硫酸根自由基(SO4·-)的高级氧化技术（SR-AOPs）具有p H范围宽、初始反应速率高、氧化性强等优点,在染料废水的处理中应用广泛,目前大部分SR-AOPs使用过硫酸盐为硫酸根自由基源。基于半导体光催化氧化的高级氧化技术绿色环保、反应条件温和,在染料废水的深度治理方面表现突出。本课题
铂和钯可能是研究和应用最广泛的电氧化有机小分子的贵金属催化剂。贵金属催化剂面临的挑战主要是其高成本及电催化过程中易被吸附态物质毒化的问题,发展贵金属电催化材料制备和电极修饰方法具有重要意义。本学位论文中,我们在简要综述贵金属纳米材料的制备与甲醇、乙醇电催化氧化的基础上,基于弱导电性铁氰化钯（II）与金的复合物（Pd HCF-Au）的均匀电沉积薄膜的电还原,制备了贵金属Pd-Au薄膜催化剂,以及基于
白光发光二极管（wLED）除了节能、环保外还具有发光效率高、使用寿命长等优点,符合“绿色发展”理念,因此被用于替代传统的荧光灯和白炽灯。目前商业上获得wLED的主流方法是利用In Ga N蓝光芯片（440-470 nm）激发Y3Al5O12:Ce3+黄色荧光粉,但由于光谱中缺少红光成分,因此获得的wLED具有相关色温（CCT）高、显色指数（CRI）低等缺点,限制了其在室内照明中的应用。为此,研究人
随着“绿水青山就是金山银山”发展理念的倡导,人们对精细化工领域绿色发展的要求愈发严苛。其中,起关键性作用的催化剂也随之发生了不断的变革,从早期的液体矿物酸,到后来的固体酸催化剂,再到今天的新型结构催化材料,均可看出独具匠心设计的特定功能型催化剂,是人们对发展绿色化学理念的执著追求。近三十年来,离子液体被设计为特定功能型材料,广泛应用于催化领域,以期望发展环保友好的绿色高效催化过程。因此,结合离子液
不饱和氨基酸是非蛋白构成的氨基酸,这类氨基酸具有重要的生物和生理活性,广泛应用于医药、农药等领域,并且其也可作为合成砌块用于生产天然产物和复杂分子,因此发展简便高效的合成方法来生产这一类氨基酸具有非常重要的意义。化学合成离不开有机试剂的参与,且反应条件相对苛刻,立体选择性较难控制。与化学合成相比,生物催化具有绿色环保、立体选择性高、反应条件温和等优点,因此,通过生物催化手段合成不饱和氨基酸更加符合
糖基转移酶（Glycosyltransferases）作为一种天然的生物催化剂,能够催化糖基从被活化的糖供体转移到多种多样的受体底物上,其中尿苷二磷酸糖基转移酶（UGT）因其对三萜类、黄酮类和大环内酯等多种天然产物的糖基化能力而著名。对于含有多个酚羟基的黄酮类底物,UGT催化糖基化时位点的选择会呈现一定的混杂性,从而会导致多个产物的生成。因此,如何实现高选择性地合成特定结构的糖苷产物就成了一个关键
近年来,全无机钙钛矿量子点因其优异的发光性能从传统的发光材料中脱颖而出。全无机钙钛矿量子点拥有窄的发射峰、高的荧光量子产率、发射范围宽且可调、高缺陷容错性、低激子结合能、高载流子迁移率和长的电子空穴扩散距离等特性,这些特性使得全无机钙钛矿量子点成为最热门和最有潜力的光电材料之一。全无机钙钛矿量子点已经广泛应用于发光二极管、液晶显示器、太阳能电池、光电探测器、传感器、激光、荧光标记等光电领域。目前,
对外部刺激具有响应性的智能胶束是近年来研究的热点之一。本论文以脂肪酸盐表面活性剂为研究对象,构筑具有p H、CO2和温度刺激响应的复配系统。结合稳态流变、动态流变、动态光散射、核磁共振波谱、透射电镜和分子动力学模拟等技术,系统的研究了胶束系统的流变性质与刺激响应机理。1.以油酸钠（Na OA）与十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）构筑p H和CO2双刺激响应复配系统。在298.15 K下,xCTAB=
心脏是哺乳动物在胚胎发育过程中最早形成的功能性器官,其形态结构和功能的形成受到一系列基因的调控。在心脏发育过程中,调控基因发生突变或是表达异常都会导致心脏的结构发育异常或功能障碍。小鼠是研究基因对心脏发育与功能作用的重要模式生物之一,通过建立小鼠基因敲除模型,对基因敲除小鼠的表型进行研究,筛选表达量异常的下游基因,并研究相关的信号通路,这有助于了解调控心脏结构形成的分子机制,为人类心脏发育缺陷的发
目的：观察听觉统合训练联合家庭康复训练在孤独症患儿中的应用效果。方法：选取2018年5月至2021年2月该院收治的98例孤独症患儿进行前瞻性研究，按随机数字表法将其分为研究组（n=49）和对照组（n=49）。两组均实施常规康复训练，在此基础上，对照组予以家庭康复训练，研究组在对照组基础上予以听觉统合训练，比较两组训练前后孤独症行为量表（ABC）评分、儿童孤独症评定量表（CARS）评分、智能发育[智