目的:对正常人群及骨关节炎患者的血清蛋白电泳图谱进行配对分析比较，寻找差异蛋白质点。应用质谱鉴定技术，对差异蛋白质点进行鉴定。经相关文献检索，分析所鉴定的蛋白质在骨关节炎的关系。为今后骨关节炎致病机制研究，生物标记物寻找，新的治疗靶点的研究奠定基础。 材料与方法: 10名符合诊断标准的膝关节OA患者(1名男性和9名女性，平均年龄60.6±7.4，BMI25.8±4.4)和10名正常志愿者(1名男性和9名女性，平均年龄55.3±4.5，BMI25.5±3.5)分别组成病例组与对照组，两组性别相匹配，年龄、BMI相当以减少混杂因素。本实验符合相关卫生部门的伦理委员会的原则。严格执行赫尔辛基宣言的相关规定，并且已征得所有入组人员的同意。对所有研究对象收集静脉血，在每个样本上加入蛋白酶抑制剂，然后分离血清样本保存在-80℃备用。将30微升血清样本放入1mL的离心管里面，根据ProteoPrepBlueAlbumin＆IgGDepletionKit(SIGMA)试剂盒和2-Dcleanupkit(AmershamBiosciences)试剂盒的说明分别用于清除样本中的白蛋白与球蛋白和盐与脂。然后利用牛血清作为标准运用Bradford法测定浓度。按照G(o)rg等方法和Bio-Rad仪器操作手册进行双相电泳。第一相等电聚焦(IEF)，血清的上样量总体积为0.35ml，(含总蛋白质0.3mg)。50V重泡胀12h后进行等电聚焦，依次经过150V1h、500V3h、1000V1h、5000V1h、7000V2h、10000V至总电压积为50000伏小时。等电聚焦结束后，迅速取出IPG胶条，分别置于平衡液A(6mmol/LUrea，2％SDS，50mmol/LTris—HCLpH8.8，30％甘油，2％DTT)、平衡液B(6mmol/LUrea，2％SDS，50mmol/LTris—HCLpH8.8，30％甘油，2.5％碘乙酰胺)中各平衡15分钟。将平衡好的胶条转入proteanⅡxicell垂直电泳槽中进行第二向电泳，聚丙烯酰胺凝胶浓度为12％，电泳条件为：每胶3W电泳30min，然后每胶7W恒功率，直至溴酚蓝指示线到达凝胶底部停止电泳，对凝胶进行银染。凝胶通过ImageScannerⅡ透射扫描仪及Labscan扫描软件进行扫描获取图像。数据以SPSS15.0进行处理。软件找出差异点后沿边缘切取凝胶上的差异蛋白质点(表达量差异在3倍以上)，置于1.5mlEP管内。蛋白点经脱色，脱水，抽干。加入5uL～10ulTPCK处理的胰蛋白酶(12.5ng/uL)，4℃冰箱中约30分钟，取出后在37℃烘箱中酶解过夜。加入50％乙腈和0.1％TFA混合液60uL，轻微振荡萃取30-40min后，将溶液转移到新的96孔板内，重复3次。将肽段溶液在N2流下吹干浓缩，然后将完全干燥的肽段重新溶解于0.7uLCHCA溶液(0.5g/L，由0.1％TFA和50％CAN配制)中，并将其全部点到不锈钢MALDI靶板上并分析。MALDI—TOF—MS分析采用反射模式，正离子谱测定，激光源为355nm波长的Nd：YAG激光器，加速电压为20KV。仪器先用myoglobin酶解肽段进行外标校正。基质和样品的PMF质量扫描范围为700-3500Da。然后直接选择与对照基质的PMF图有差异的肽段离子进行MS/MS分析。所有实验样品的质谱图均用默认模式获得。利用软件Mascotdistiller过滤基线峰、识别信号峰。利用Matrixscience公司的Mascot软件搜索NCBInr数据库(http：//www.matrixscience.com)，寻找匹配的相关蛋白质，同时查询其功能，来明确鉴定的蛋白质为何种蛋白质。 结果: 1、通过二维电泳图普比较发现7个差异表达蛋白，其中6个在关节炎组中呈低表达，1个呈高表达。 2、经质谱鉴定为分别为：6个低表达蛋白分别为对氧磷酶1、对氧磷酶3、α-1-微球蛋白/bikunin前体蛋白、载脂蛋白M、免疫球蛋白轻链(或与之极类似的推定的未知特性蛋白)、四连接素，高表达蛋白为载脂蛋白LI。 结论: 本实验结果提示APOLI、APOM、TNA、IgL(或与之极类似的推定的未知特性蛋白)、PON1、PON3、AMBP七种蛋白在OA患者及正常人群中差异表达。这种差异可能与OA致病机制或病情进展机制中的炎症过程、氧化压力上升、异常的免疫反应及细胞外基质代谢异常相关，但其具体意义、具体作用途径及OA特异性尚需进一步研究以阐明。