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研究背景动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是冠心病的病理基础,血管内皮细胞损伤引起的功能障碍是AS的始动环节。目前,氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的受损血管内皮细胞常作为研究AS的细胞模型。研究发现半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)通过调节炎症因子促进AS的发生发展,而Gal-3在ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤中的作用尚不明确。既往研究显示,Gal-3细胞生物学行为与其对integrinβ1、Rho A、JNK调节有关,而在AS中尚未见报道。我们假设Gal-3通过integrinβ1‐Rho A‐JNK通路介导炎症促进ox-LDL对血管内皮细胞的损伤。本论文分为两部分:(1)Gal-3对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的影响;(2)Gal-3介导炎症促进ox-LDL对血管内皮细胞的损伤的信号通路的研究。研究目的探讨Gal-3对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其调控通路。研究方法1.人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)经不同浓度(0、50、100和150μg/ml)和不同时间ox-LDL(0、4、8、12h)处理,实时定量PCR和免疫印迹(WB)测Gal-3的m RNA和蛋白表达2.HUVECs分9组:A.Control B.ox-LDL C.Gal-3D.Gal-3+ox-LDL E.control-si RNA+Gal-3+ox-LDL F.integrinβ1-si RNA+Gal-3+ox-LDL G.Rho A抑制剂+ox-LDL H.Rho A抑制剂+Gal-3+ox-LDL I.JNK抑制剂+Gal-3+ox-LDL3.Gal-3对ox-LDL诱导的HUVECs影响:分别检测A、B、C、D组,MTT测细胞增殖,流式细胞仪测细胞凋亡;WB及ELISA测炎症相关因子表达:NF-κB蛋白(IKKα、IKKβ、p65)及其磷酸化蛋白(p-IKKα、p-IKKβ、pp65)、黏附分子(ICAM-1、VCAM-1)、促炎因子(IL-6、IL-8、IL-1β)和趋化因子(CXCL-1、CCL-2)。4.Gal-3在ox-LDL诱导的HUVECs中对integrinβ1-Rho A-JNK通路的调节1)Gal-3对integrinβ1、Rho A、JNK蛋白表达影响:免疫荧光或WB法测A、B、C、D组integrinβ1、Rho A、GTP-Rho A、JNK、p-JNK蛋白表达;2)integrinβ1-si RNA对Rho A和JNK表达影响:WB测B、D、E、F组Rho A、GTP-Rho A、JNK及p-JNK蛋白表达;3)免疫印迹法检测B、D、G、H组JNK、p-JNK蛋白表达。5.Gal-3在ox-LDL诱导的HUVECs中通过integrinβ1-Rho A-JNK通路影响细胞增殖、凋亡及炎性因子表达检测B、D、E、F、I各组相关指标:1)MTT测增殖水平,流式细胞仪测凋亡水平;2)WB及ELISA测炎症相关因子表达(见研究方法3)。研究结果1.ox-LDL处理HUVECs后,Gal-3表达升高;Gal-3可抑制ox-LDL处理的HUVECs增殖、促进其凋亡,并上调炎症相关因子表达(见研究方法3);2.Gal-3可上调ox-LDL处理HUVECs中integrinβ1、Rho A、GTP-Rho A和JNK、p-JNK表达; 3.integrinβ1-si RNA后,GTP-Rho A和p-JNK蛋白表达下降;Rho A抑制剂可下调p-JNK蛋白表达,且Gal-3和Rho A抑制剂联用时Gal-3对JNK的上调作用被抑制;4.integrinβ1-si RNA或JNK阻断剂可抑制ox-LDL诱导的HUVECs增殖、促进其凋亡,并抑制炎症相关因子表达(见研究方法3)。结论1.在ox-LDL诱导的HUVECs中,Gal-3可抑制细胞增殖、提高其凋亡、促进炎症反应;2.Gal-3可通过integrinβ1-Rho A-JNK通路促进ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应,加重损伤效应。