【摘 要】
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Tp受体激动后,小梁网中的平滑肌组织具体收缩机制及信号传导尚不清楚.该课题以牛眼小梁网细胞为研究对象,鉴定小梁网Tp受体的存在,研究Ca及PKC在小梁网的收缩中的信号传导,并
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Tp受体激动后,小梁网中的平滑肌组织具体收缩机制及信号传导尚不清楚.该课题以牛眼小梁网细胞为研究对象,鉴定小梁网Tp受体的存在,研究Ca<2+>及PKC在小梁网的收缩中的信号传导,并探讨了其可能机制.阐明Tp受体在小梁网收缩中的作用,为抗青光眼药物的开发提供一定的线索和实验依据.第一部分 牛小梁网细胞的体外培养及Tp受体的鉴定 方法:从牛眼上将小梁网分离下来,转移至培养瓶内进行培养.待培养至第三至七代即可用于试验.提取细胞的总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(revese transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞表面Tp受体mRNA的表达情况.第二部分 Tp受体对小梁网细胞内钙的影响 方法:将细胞悬液以Fura-2/AM负载,利用RF-5000荧光分光光度计进行细胞[Ca<,2+>]i测定,激发光波长分别为340nm和380nm;发射光波长为510nm.采样间隔为1秒.根据文献公式计算细胞[Ca<,2+>]i.第三部分 PKC对细胞收缩的作用 方法:细胞总蛋白的提取,免疫印迹(immunoblotting or western blotting)检测磷酸化PKC蛋白的水平.结论:1.该实验证明了牛小梁网上存在Tp受体.2.TP受体激动后引起小梁网细胞内Ca<2+>的升高,该作用是通过胞内Ca<2+>释放导致的.电压依赖性Ca<2+>通道(VDCC)不参与Ca<2+>的内流.3.TP受体激活,引起了PKC的磷酸化,并提示PKC也可能参与了小梁网细胞的收缩.
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