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从河南林州某猪场大批死亡仔猪的脾、肾及脑组织当中分离到一株疑似猪伪狂犬病毒（PRV）的毒株，该毒株经细胞连续传代培养后，接种PK-15细胞能够出现明显的细胞病变，与PRV阳性血清进行微量中和试验，结果证明该病毒毒株能够被阳性血清中和，通过对该病毒半数细胞感染量（TCID50）的测定得出结果TCID50=10-5.3/0.1ml。病毒对氯仿、乙醚敏感，56℃水浴30min能使其灭活。将所分离的病毒分别接种于小白鼠和家兔，数天后均表现有明显的伪狂犬病临床症状。根据GeneBank当中所显示的猪伪狂犬病毒gp50基因的保守序列设计引物，利用酶链聚合反应（PCR）技术扩增出gp50基因片段，将扩增产物进行切胶回收，纯化克隆后送去测序公司进行测序，利用DNA Star软件将测序结果与其它经典猪伪狂犬毒株进行序列比对分析，同源性达到99%，结果证实所分离病毒为猪伪狂犬病毒。该分离病毒的某些生物学特性有待进一步分析与研究。本研究参照GanBank中（序列号：JF797219）的典型PRV毒株基因组完整序列，在非编码区域利用Primer Premier5软件设计出多对特异性引物。通过PCR条件优化筛选出合理的扩增方法，利用PCR技术分段扩增出猪伪狂犬病毒非编码区短片段DNA，获得大小不同的非编码区DNA短片段基因，将扩增的产物DNA片段经纯化、克隆与载体相连接，并通过对阳性菌进行PCR扩增及核苷酸序列的测序分析，成功构建出非编码区DNA文库。本研究通过细胞培养和分离鉴定获得了PRV毒株，即PRV Linzhou株（暂定名），为PRV的毒力演变和分子生物学的研究奠定了基础，同时构建了该毒株基因组非编码区DNA文库，为PRV非编码区对病毒复制和潜伏感染调控功能的研究提供了研究素材。