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H9N2亚型禽流感病毒灭活疫苗主要激发体液免疫应答,临床上高抗体水平的禽群感染H9N2禽流感病毒发病的情况时有发生。研究表明细胞免疫更有利于阻止流感病毒的感染,因此研制高效的H9N2禽流感病毒疫苗变得极为重要。哺乳动物IgG Fc片段可以作为分子佐剂增强与其融合蛋白的细胞免疫应答和体液免疫应答。本研究室前期研究表明鸡艾美耳球虫(Eimeria species)具有作为疫苗活载体的潜能。因此,本论文用融合表达禽IgY Fc或鼠IgG Fc片段和H9N2亚型流感病毒HA1的转基因艾美耳球虫为活载体疫苗,以鸡和小鼠为动物模型研究Fc片段对球虫和流感病毒抗原的免疫增强作用。本研究首先用原核表达的融合蛋白检测了禽IgY Fc片段对H9N2流感病毒保护性抗原HA/HA1的免疫增强作用。研究发现融合蛋白HAlchFc降低了免疫组鸡群流感病毒的排出,表明禽IgY Fc片段具有类似哺乳动物IgG Fc片段的分子佐剂功能。基于此研究,我们分别构建了表达鸡IgY Fc片段(Emi.chFc, Et.chFc、H9N2流感病毒HA1(Emi.HA1,Et.HA1)、表达鸡IgY Fc和HA1的融合蛋白(Emi.HAlchFc, Et.HAlchFc)以及鼠IgG Fc片段和HA1的融合蛋白(Emi.HA1mFc, Et.HA1mFc)的4株转基因和缓艾美耳球虫和4株转基因柔嫩艾美耳球虫,以用于后续的免疫原性研究。我们用转基因虫株Emi.chFc和Et.chFc免疫鸡群后发现,鸡IgY Fc片段可以显著增强和缓艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫抗原的免疫原性。转基因和缓艾美耳球虫Emi.HA1chFc和Emi.HA1以滴鼻或口服卵囊途径没有激发鸡产生流感病毒特异性的免疫应答。Emi.HA1mFc除了可以激发鼠产生较强的和缓艾美耳球虫特异性的IgG抗体应答,还可以产生流感病毒特异性IgA抗体应答及保护性免疫应答。研究表明鸡IgY Fc片段对球虫抗原具有免疫增强作用,但对流感病毒特异性的免疫应答增强作用不明显；鼠IgG Fc片段对和缓艾美耳球虫抗原和H9N2亚型流感病毒都有免疫增强作用。我们还利用球虫卵囊与H9N2流感病毒灭活疫苗共同免疫的方式研究了转基因柔嫩艾美耳球虫卵囊对灭活疫苗免疫效果的增强作用。皮下注射灭活疫苗同时口服球虫卵囊或皮下注射灭活疫苗和卵囊的混合物免疫鸡均能提高灭活疫苗产生的血凝抑制抗体(HI)滴度,增加分泌IFN-γ的淋巴细胞数量,降低免疫组攻毒后同居鸡群的排毒量。类似的,将球虫卵囊与灭活疫苗混匀的免疫方式皮下免疫鼠,添加球虫卵囊的灭活疫苗可以提高流感病毒特异性Thl型免疫应答和HI抗体效价,减少攻毒后小鼠的体重损失；但是表达流感病毒HA1的转基因柔嫩艾美耳球虫Et.HAl和Et.HAlmFc与野生球虫在增强灭活疫苗免疫效果方面差异不显著。综上,鸡IgY Fc片段可以显著增强球虫抗原的免疫原性,但其增强融合抗原HA1的免疫原性尚不明显。鼠IgG Fc片段可以显著增强和缓艾美耳球虫和H9N2流感病毒的保护性抗原HA1的免疫原性。柔嫩艾美耳球虫与灭活疫苗共同免疫可以提高鸡群或小鼠激发产生的流感病毒特异性免疫应答,具有作为灭活H9N2流感病毒疫苗佐剂的潜能。本研究为球虫能成为一种疫苗载体和疫苗佐剂提供了新的理论依据。