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目的:抑制素B(inhibin B,INHB)是由α及β(B型)亚单位构成的异源二聚体糖蛋白激素,属于转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族的多功能细胞生长因子。在卵巢组织,INHB主要由中、小窦卵泡颗粒细胞分泌,颗粒细胞分泌的INHB可通过内分泌机制特异性作用于脑垂体反馈性抑制促性腺激素(follicular stimulation hormone,FSH)分泌,同时还可通过自/旁分泌作用增加雌激素(estrogen,E2)底物产生进而调节E2的生成,INHB的这种经典的内分泌及自/旁分泌作用,在卵泡发生、发育、选择和成熟等过程中均起到重要作用。本实验通过对不同控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimu-lation,COH)方案中不同时间节点的血清及取卵日不同大小卵泡中抑制素B(inhibin B,INHB)水平进行检测并与COH结局进行相关分析,进而探讨不同COH方案中血清及卵泡液(follicular fluid,FF)中INHB动态变化过程及其与COH结局的相关性。方法:1研究对象2015.7~2015.12月主因输卵管因素和/或男方因素在石家庄白求恩国际和平医院生殖中心首次接受IVF/ICSI-ET助孕的76例患者,将其随机分为长方案组(38例)及非降调方案组(38例)。纳入标准:年龄<35岁;双侧卵巢AFC共10-20个;体重指数18-25kg/m2;月经周期26-35天;基础激素水平正常;双侧卵巢无手术史;无其他内分泌疾病,近6个月内未应用过激素类药物。排除标准:高泌乳素血症;PCOS;子宫内膜异位症。所有受试者均经医院伦理委员会批准,签署知情同意书。2 COH方案2.1短效长方案治疗前一周期的黄体中期皮下注射促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin-releasing hormone agonist,Gn RH-a)达菲林(注射用醋酸曲普瑞林,0.1mg/支,法国益普生)0.1mg/d至月经第3天起检测血清雌二醇(estrogen,E2)、孕酮(progesterone,P)、黄体生成素(luteinzing hormone,LH)、促卵泡生成素(follicular stimulation hormone,FSH)并超声监测降调情况,达降调标准后(E2<50pg/ml,P<2ng/ml,LH<5m IU/ml,FSH<5m IU/ml;B超显示无直径大于10mm的卵泡,子宫内膜<5mm,无功能性囊肿)改皮下注射达菲林0.05mg/d,同时给予促性腺激素(gonadotropins,Gn)75-300IU/d直至扳机日。当B超示双侧卵巢≥18mm的卵泡个数/≥14mm卵泡个数≥60%,≥14mm卵泡血清E2平均水平值为200-300pg/ml时,当晚皮下注射重组人绒毛膜促性腺激素(Recombinant human chorionic gonadotropin,rh CG,250ugug/支,默克雪兰诺有限公司)250ug,35-36小时后经阴道超声引导下穿刺取卵。取卵(ovum pick up,OPU)后3d,当子宫内膜≥8mm,P<1.5ng/ml,且无卵巢过度刺激综合征(OHSS)风险时,行胚胎移植。OPU当日起每日肌注射黄体酮(20mg/支,浙江仙琚制药)60mg,自移植日起添加黄体酮软胶囊(100mg/胶囊,法国卡普苏格尔有限公司)200mg/支阴道给予,行黄体支持。移植14d后检测血清h CG水平确定是否妊娠,4周后B超检查观察到妊娠囊确定临床妊娠。2.2非降调方案月经第3天起口服来曲唑(LE,2.5mg/片,江苏恒瑞)2.5mg/d,同时注射用尿促性素(h MG,75IU/支,中国丽珠医药集团股份有限公司)150-300IU肌注,1次/d,连用5天后停来曲唑改口服枸橼酸氯米酚(CC,50mg/片,塞浦路斯高特药厂),严密超声监测卵泡直径,并检测血E2、P、FSH、LH。达扳机标准后,当晚50-100mg/d皮下注射达菲林0.2mg,吲哚美辛栓(50mg/片,东信药业有限公司)50mg,直肠给药1次/8h。余治疗同短效长方案组。3血清及FF收集收集月经第3天、降调月经第3天、Gn启动日、Gn第5天、h CG日、h CG次日、OPU第3天清晨空腹外周静脉血,并于12小时内2000*rpm离心10min,取上清1ml于1.5ml EP管置于-80℃冰箱,待检。同时,收集OPU日清亮FF并根据卵泡大小将其分为大中小三类(大卵泡:直径≥18mm、中卵泡:14mm≤直径<18mm、小卵泡:10mm≤直径<14mm),3000*rpm离心10min,取上液约3ml于5ml EP管置于-80℃冰箱,待检。4 INHB及血清E2、P、LH、FSH的测定应用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒(美国Anshlabs公司)检测血清和FF中INHB水平。应用化学发光免疫测定试剂盒(ELECSYS,罗氏,德国)检测血清E2、P、LH、FSH水平。5数据统计分析采用SPSS21.0软件,计量资料采用均数±标准差表示,组间数据比较用两独立样本t检验或t’检验。组内数据比较采用配对样本t检验或Wilcoxon秩和检验。相关性分析采用Pearson相关系数进行分析。P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1患者一般情况纳入76例IVF助孕患者,根据促排卵方案的不同分为短效长方案组及非降调组,每组各38例,共76个COH周期。两组患者年龄、月经周期、不孕年限、基础内分泌情况及AFC差异无统计学意义(P>0.05),两组资料具有可比性。2 COH相关参数比较长方案组Gn用量为1998.68±154.76IU较非降调组的2110.20±150.00IU明显降低(P=0.002);长方案组Emh CG日厚度及E2h CG日分别为10.83±1.51mm和4160.40±1073.67pg/ml较非降调组的9.12±0.98mm及3737.51±643.28pg/ml明显升高(P=0.000;P=0.041)。与非降调组比,长方案组获卵数稍高,而Gn天数、MⅡ卵数、2PN受精数、优质胚数及可利用胚数稍低(P>0.05)。3 COH中血清及FF中INHB水平变化降调过程中,降调月经第3天和降调18天即Gn启动日血清INHB水平分别为:50.63±23.80pg/ml、28.99±8.83pg/ml,两者较基础的89.07±26.07pg/ml明显下降,差异有显著统计学意义(P=0.000)。Gn启动日长方案组血清INHB水平为28.99±8.83pg/ml,明显低于非降调组的79.08±21.98pg/ml,有显著统计学差异(P=0.000)。Gn启动后两组血清INHB水平呈上升趋势至h CG日达高峰后下降,OPU第3天显著下降。且两组基础及Gn启动后的血清INHB水平无统计学差异(P>0.05)。两组FF中INHB水平随卵泡直径增大而升高。大卵泡INHB水平差异无统计学意义(p>0.05);但长方案组中小卵泡INHB水平明显高于非降调组,差异有显著统计学意义(P=0.000)。4 INHB与COH结局的相关性分析两方案中与COH结局相关性由强到弱的血清INHB检测时间分别是:Gn第5天、h CG日、h CG次日、基础月经第3天及OPU第3天。且长方案降调月经第3天及Gn启动日INHB水平与COH结局也有较好的相关性,其中Gn启动日血清INHB水平与Gn用量显著负相关(r=-0.716,P<0.01)与E2h CG日显著正相关(r=0.600,P<0.01)。两方案中,大卵泡INHB水平与COH结局相关性最强;中卵泡INHB水平与COH结局也存在较好的相关性;而小卵泡INHB水平与COH结局相关性不明确。结论:1长方案降调过程中血清INHB水平显著下降,且降调后的血清INHB水平预示着降调节对卵泡同步化作用较好。2 COH过程中的血清及大中卵泡INHB水平能够很好的预测卵巢反应性及COH结局。