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羊踯躅根为杜鹃花科(EricAceAe)杜鹃花属(Rhododendron)植物羊踯躅(Rhododendron Molle G.Don)的干燥根。羊踯躅根具有抗炎、镇痛、免疫抑制等作用,曾做为医院制剂治疗类风湿性关节炎,疗效显著,且毒副作用小,具有较好的研究价值。 本课题包括两个方面的内容: 一.药学研究,对醇浸膏用大孔树脂富集得到有效部位,并测定其总黄酮含量;对羊踯躅根有效部位进行分离纯化,鉴定其化学成分。旨在研究羊踯躅根治疗类风湿性关节炎有效部位的组成和物质基础,以提供质量可控的原料药做药效学研究,并为今后的临床研究与制剂做准备。 通过大孔树脂吸附法,将醇浸膏拌样吸附于树脂上,依次用50％乙醇和95％乙醇做洗脱溶剂,得到50％部分和95％部分。用经典的NANO2-Al(NO3)3-NAOH显色法,以芦丁为对照品,测定浸膏及过大孔树脂后两部分的总黄酮含量。多批实验测定结果显示,经大孔树脂后的50％部分平均含量为75.81％,95％部分为26.86％。将50％和95％部分按比例合并,得到含量在60％以上的有效部位。 大孔树脂50％和95％乙醇洗脱部分分别经过硅胶柱、聚酰胺柱、SephAdex LH-20凝胶柱、ODS反相柱等柱层析方法分离纯化,得到5个单体化合物。应用UV,HPLC,1H-NMR,13C-NMR等波谱学分析方法,鉴定其结构。五个化合物分别为:熊果酸ursolic Acid(Ⅰ),原儿茶酸protocAtechuic Acid(Ⅱ),儿茶素(+) cAtechin(Ⅲ),表儿茶素(-) epicAtechin(Ⅳ)和芦丁rutin(Ⅴ)。其中,原儿茶酸(Ⅱ)、表儿茶素(Ⅳ)和芦丁(Ⅴ)为首次从羊踯躅植物分离得到。熊果酸(Ⅰ)和儿茶素(Ⅲ)为首次从羊踯躅根中分离。 二.药效学研究: 羊踯躅根有效部位的急性毒性研究,以了解其安全性,为动物实验给药剂量提供依据。急性毒性实验表明,羊踯躅根有效部位的LD50=3.491g/kg。 对羊踯躅根有效部位在实验性关节炎的作用进行研究,以了解其对类风湿性关节炎的作用及作用机理。 本实验以佐剂性关节炎(AA)大鼠为实验模型,模型组给予0.5％CMC-NA溶液;阳性对照组给予雷公藤多苷;羊踯躅根治疗组给予不同剂量的羊踯躅根有效部位。观察大鼠足爪肿胀情况和踝关节病理组织变化。用MTT法检测各组大鼠的脾淋巴细胞转化率(LTT),ELISA法检测血清和脾细胞培养液中肿瘤坏死因子(TNF-α),血清中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)的浓度。 实验结果显示,羊踯躅根有效部位可显著抑制AA大鼠的足肿胀,减轻病变关节滑膜增生与炎症反应;抑制AA大鼠的脾淋巴细胞转化率,降低血清和脾细胞培养液中TNF-α和血清中IL-6浓度。 动物实验证实,羊踯躅根对佐剂性关节炎有明显的抑制作用,其抗炎作用可能与抑制淋巴细胞增殖和调节炎症相关细胞因子的分泌有关。