论文部分内容阅读
本研究以西藏地区多年生黑麦草(LoliumperenneL.)、苇状羊茅(Festuca arundinacea Schred.)、紫花苜蓿(Medicago sativa L.)、箭筈豌豆(Vicia sativa L.)和芦苇(Phragmites australis)为青贮原料,研究其青贮发酵特性;并从中分离,鉴定和筛选出耐低温乳酸菌菌株;将获得的乳酸菌菌株添加到意大利黑麦草中进行青贮,研究所筛选的乳酸菌菌株在10℃,15℃和25℃条件下对意大利黑麦草青贮发酵品质的影响;同样将获得的乳酸菌菌株添加到西藏地区苇状羊茅和燕麦秸秆中进行青贮,研究在西藏当地条件下乳酸菌菌株对苇状羊茅和燕麦秸秆青贮发酵品质的影响;旨在确定适应于西藏特殊气候条件下的优良乳酸菌菌种,为西藏生产优质青贮饲料的专用乳酸菌添加剂研制提供理论依据。1西藏主要牧草青贮特性的研究本试验旨在研究西藏地区多年生黑麦草、苇状羊茅、紫花苜蓿、箭筈豌豆和芦苇的化学和微生物成分,以及影响青贮饲料发酵品质的主要因素。结果表明:五种牧草的干物质和水溶性碳水化合物含量均较高,其中禾本科牧草多年生黑麦草、苇状羊茅和芦苇的缓冲能低,而紫花苜蓿、箭筈豌豆的缓冲能较高;单独青贮较难成功。5种牧草表面均附着有大量的好气性细菌,霉菌和酵母,但乳酸菌数量较少,未能达到优质青贮生产所要求的乳酸菌数量。青贮发酵45 d后,多年生黑麦草、苇状羊茅,箭筈豌豆,紫花苜蓿和芦苇青贮饲料的pH值均高于4.2(4.3～4.9),乳酸含量较低(3.19～77.88),部分丁酸含量高(8.6～10.10),未达到优质青贮饲料的标准,综上所述,影响五种牧草青贮发酵品质的主要因素是表面附着的乳酸菌数量与活性不足所致。2西藏牧草青贮饲料中乳酸菌的分离与鉴定本试验分离得到20株同型发酵乳酸菌菌株,经糖发酵试验和16S rRNA序序列同源性分析鉴定,确定AG11,LCG9,CG35,T22,TG20,LG4,LLG7和LL8为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus);LTG7为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici);LA3为弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatu);LI3和LIG5为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei);15和LG2为类植物乳杆菌(Lactobacillus paraplantarum);LAG1,LCG3,12,TG1,L2为植物乳杆菌(Lactobacilaus plantarum);LT4为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosaceu);所分离菌株均具有耐低温,耐酸碱和强的耐盐特性,其中15,LI3,LTG7和LCG3的生长产酸能力最强,同时具备较强的耐低温和耐酸碱特性,最适宜于用作青藏高原青贮用乳酸菌添加剂。因此选取I5,LI3,LTG7和LCG3作为青贮饲料添加剂进行验证研究。3乳酸菌菌株对不同温度条件下意大利黑麦草青贮发酵品质的影响本试验研究了类植物乳杆菌(L.paraplantarum)I5,干酪乳杆菌(L.casei)LI3,乳酸片球菌(P.acidilactici)LTG7,植物乳杆菌(L.plantarum)LCG3和商品菌(L.plantarum)G在不同温度条件下对意大利黑麦草青贮发酵品质的影响。结果表明:在10℃,15℃和25℃条件下,5种乳酸菌均显著提高了意大利黑麦草青贮饲料的DM、水溶性碳水化合物和乳酸含量,乳酸/乙酸值和乳酸菌数量(P<0.05),显著降低了pH值、挥发性脂肪酸含量,氨态氮/总氮值和好气性细菌、霉菌和酵母数量(P<0.05),显著改善了低温条件下意大利黑麦草青贮饲料的发酵品质。且15,LI3,LCG3和商品菌G的改善效果优于LTG7,其中,15的效果最显著。4乳酸菌菌株对西藏苇状羊茅和燕麦秸秆青贮发酵品质的研究本试验由两个部分组成。试验一研究了类植物乳杆菌(L.paraplantarum)15,干酪乳杆菌(L.casei)LI3,乳酸片球菌(P.acidilactici)LTG7,植物乳杆菌(L.plantarum)LCG3和商品菌(L.plantarum)G对西藏苇状羊茅青贮饲料发酵品质的影响。结果表明:青贮35d后,与对照组相比,5种乳酸菌均显著提高了苇状羊茅青贮饲料的DM、水溶性碳水化合物和乳酸含量以及乳酸/乙酸值(P<0.05),均显著降低了 pH值、挥发性脂肪酸含量、氨态氮/总氮值、好气性细菌、霉菌和酵母数量(P<0.05),显著改善了苇状羊茅青贮饲料的发酵品质。且15,LI3,LTG7和LCG3的改善效果优于商品菌G,其中,15的效果最显著。试验二研究了类植物乳杆菌(L.paraplantarum)15,干酪乳杆菌(L.casei)LI3,乳酸片球菌(P.acidilactici)LTG7,植物乳杆菌(L.plantarum)LCG3和商品菌(L.plantarum)G对西藏燕麦秸秆青贮饲料发酵品质的影响。结果表明:青贮35d后,对照组燕麦秸秆青贮饲料的pH值和氨态氮/总氮值较高,发酵品质较差;加入15,LI3,LTG7,LCG3和商品菌G后,其DM、水溶性碳水化合物和乳酸含量,乳酸/乙酸值均得到显著提高(P<0.05),pH值、挥发性脂肪酸、氨态氮/总氮值、好气性细菌、霉菌和酵母数量均显著降低(P<0.05),显著改善了燕麦秸秆青贮饲料的发酵品质。且15,LI3,LTG7和LCG3的改善效果优于商品菌G,其中,15的效果最显著。综上所述,本研究分离得到的类植物乳杆菌(L.paraplantarum)I5,干酪乳杆菌(L.casei)LI3,乳酸片球菌(P.acidilactici)LTG7和植物乳杆菌(L.plantarum)LCG3对西藏苇状羊茅和燕麦秸秆青贮饲料发酵品质的改善效果均优于商品菌(L.plantarum)G,更适宜用作西藏地区青贮用乳酸菌添加剂;而I5的改善效果最显著,最适宜于推广应用。