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背景：
肝细胞癌(hepaticcellularcancer，HCC)是全球第六大最常见的癌症，在实体瘤相关的死亡率排名中位列第三。肝细胞癌是最常见的原发性肝脏恶性肿瘤，其发病率在近几十年一直呈现上升趋势。索拉非尼是一种多激酶抑制剂，是提高晚期肝癌患者生存率的唯一全身治疗药物。辣椒素(8?methylN?vanillyl?6nonenamide)是一种天然植物提取物，具有潜在的抗肿瘤特性，能在包括肝癌在内的各种类型的恶性肿瘤中促进细胞凋亡。辣椒素和索拉非尼都可以抑制一条与肝癌细胞增殖、侵袭和迁移密切相关的信号通路EGFR/PI3K/Akt/mTOR信号通路。因此，该通路有望成为辣椒素联合索拉非尼治疗肝癌的有效靶点。本研究的目的是研究辣椒素和索拉非尼在体外和体内的抗肿瘤活性,确定两者单独用药以及联合用药的效果,以探究两者联合用药是否可以协同诱导肝癌细胞的凋亡和自噬，抑制肝癌细胞增殖,迁移和侵袭。
目的：
1.研究辣椒素和索拉非尼单独和联合用药对肝癌细胞生长活性的影响，并探究二者在不同浓度组合下的抑制作用。
2.研究辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞凋亡和自噬的促进作用。
3.研究辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞侵袭和迁移的的抑制作用。
4.研究辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞的EGFR/PI3K/Akt/mTOR信号通路转导的抑制作用。
5.裸鼠皮下异种成瘤，研究辣椒素和索拉非尼在体内治疗对肝癌细胞的抑制作用。
方法：
1.用CCK8活性检测实验检测辣椒素和索拉非尼对不同肝癌细胞活性的影响，研究二者能否协同抑制肝癌细胞活性。
2.探究辣椒素和索拉非尼不同的浓度组合对肝癌细胞的活性影响，选择合适的浓度组合进行细胞克隆形成实验，观察二者对细胞增殖的影响。
3.TUNEL法和流式细胞仪检测辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞凋亡的影响，WB检测二者作用后细胞内凋亡相关指标Bax、Bcl-2、cleavedcaspase-3、cleavedPARP的变化。
4.WB检测辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞中自噬相关指标beclin-1、LC3、P62的影响。
5.细胞划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验探究辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞迁移和侵袭的影响，WB检测迁移和侵袭相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9的表达。
6.WB检测辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞中EGFR/PI3K/Akt/mTOR信号通路表达的影响。
7.裸鼠体内成瘤，辣椒素和索拉非尼治疗后，测量对照组、单药组和联合用药组肿瘤大小，检测肿瘤细胞内增殖、凋亡、自噬、迁移和侵袭相关指标的表达，验证辣椒素和索拉非尼在体内对肿瘤的影响；称量裸鼠体重，取血检测肝肾功能，肝肾组织切片HE染色观察，研究二者对机体的药物毒性。
结果：
1.CCK8细胞活性检测实验显示辣椒素和索拉非尼可以抑制Hp3B,LM3,Huh7三种肝癌细胞的活性，且联合用药可以协同抑制细胞活性。
2.不同浓度组合的辣椒素和索拉非尼对LM3细胞活性都存在协同抑制作用，选择辣椒素80μM和索拉非尼4μM进行后续实验。细胞克隆实验显示辣椒素和索拉非尼可以协同抑制LM3的克隆形成能力。
3.TUNEL法和流式细胞技术检测细胞凋亡均显示辣椒素和索拉非尼可以增强LM3细胞的凋亡，且二者联合后对细胞的凋亡具有协同促进作用，WB结果显示用药后细胞促凋亡蛋白Bax的表达上调，抗凋亡蛋白Bcl2的表达降低，Cleaved-caspase3，Cleaved-PARP表达上调，且二者存在协同效应。
4.WB结果显示辣椒素和索拉非尼作用于LM3细胞后，细胞自噬水平上升，联合用药组较单药组明显上升。
5.细胞划痕实验结果显示辣椒素和索拉非尼联合应用可以协同抑制LM3细胞迁移；Transwell迁移和侵袭实验结果显示二者可以协同抑制LM3迁移和侵袭作用。WB结果显示用药后E-cadherin水平上升，N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9均下降。
6.WB结果显示辣椒素和索拉非尼联合可以协同下调LM3细胞中EGFR、PI3K/Akt/mTOR信号通路和下游蛋白P-p70s6k。
7.体内实验结果显示：辣椒素和索拉非尼联合可以协同抑制肿瘤生长；用药后四组裸鼠体重无明显区别；用药后肿瘤细胞中凋亡自噬水平上升，增殖、迁移和侵袭相关指标表达下降；用药组和对照组裸鼠肝肾功能无明显差异；HE切片显示用药组与对照组裸鼠肝肾组织结构无明显差异。
结论：
辣椒素和索拉非尼可以抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭，可以促进肝癌细胞的凋亡和自噬，而且二者联合用药可以发挥协同抗肝癌细胞作用。辣椒素和索拉非尼的这种协同抗肿瘤作用可能是因为抑制EGFR、PI3K/Akt/mTOR信号通路引起的。在体内实验中，辣椒素和索拉非尼同样存在协同抗肿瘤的作用，且二者对裸鼠无明显的毒副作用。所以，辣椒素和索拉非尼联合用药有望成为治疗晚期肝癌患者的有效方法。
肝细胞癌(hepaticcellularcancer，HCC)是全球第六大最常见的癌症，在实体瘤相关的死亡率排名中位列第三。肝细胞癌是最常见的原发性肝脏恶性肿瘤，其发病率在近几十年一直呈现上升趋势。索拉非尼是一种多激酶抑制剂，是提高晚期肝癌患者生存率的唯一全身治疗药物。辣椒素(8?methylN?vanillyl?6nonenamide)是一种天然植物提取物，具有潜在的抗肿瘤特性，能在包括肝癌在内的各种类型的恶性肿瘤中促进细胞凋亡。辣椒素和索拉非尼都可以抑制一条与肝癌细胞增殖、侵袭和迁移密切相关的信号通路EGFR/PI3K/Akt/mTOR信号通路。因此，该通路有望成为辣椒素联合索拉非尼治疗肝癌的有效靶点。本研究的目的是研究辣椒素和索拉非尼在体外和体内的抗肿瘤活性,确定两者单独用药以及联合用药的效果,以探究两者联合用药是否可以协同诱导肝癌细胞的凋亡和自噬，抑制肝癌细胞增殖,迁移和侵袭。
目的：
1.研究辣椒素和索拉非尼单独和联合用药对肝癌细胞生长活性的影响，并探究二者在不同浓度组合下的抑制作用。
2.研究辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞凋亡和自噬的促进作用。
3.研究辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞侵袭和迁移的的抑制作用。
4.研究辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞的EGFR/PI3K/Akt/mTOR信号通路转导的抑制作用。
5.裸鼠皮下异种成瘤，研究辣椒素和索拉非尼在体内治疗对肝癌细胞的抑制作用。
方法：
1.用CCK8活性检测实验检测辣椒素和索拉非尼对不同肝癌细胞活性的影响，研究二者能否协同抑制肝癌细胞活性。
2.探究辣椒素和索拉非尼不同的浓度组合对肝癌细胞的活性影响，选择合适的浓度组合进行细胞克隆形成实验，观察二者对细胞增殖的影响。
3.TUNEL法和流式细胞仪检测辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞凋亡的影响，WB检测二者作用后细胞内凋亡相关指标Bax、Bcl-2、cleavedcaspase-3、cleavedPARP的变化。
4.WB检测辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞中自噬相关指标beclin-1、LC3、P62的影响。
5.细胞划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验探究辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞迁移和侵袭的影响，WB检测迁移和侵袭相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9的表达。
6.WB检测辣椒素和索拉非尼对肝癌细胞中EGFR/PI3K/Akt/mTOR信号通路表达的影响。
7.裸鼠体内成瘤，辣椒素和索拉非尼治疗后，测量对照组、单药组和联合用药组肿瘤大小，检测肿瘤细胞内增殖、凋亡、自噬、迁移和侵袭相关指标的表达，验证辣椒素和索拉非尼在体内对肿瘤的影响；称量裸鼠体重，取血检测肝肾功能，肝肾组织切片HE染色观察，研究二者对机体的药物毒性。
结果：
1.CCK8细胞活性检测实验显示辣椒素和索拉非尼可以抑制Hp3B,LM3,Huh7三种肝癌细胞的活性，且联合用药可以协同抑制细胞活性。
2.不同浓度组合的辣椒素和索拉非尼对LM3细胞活性都存在协同抑制作用，选择辣椒素80μM和索拉非尼4μM进行后续实验。细胞克隆实验显示辣椒素和索拉非尼可以协同抑制LM3的克隆形成能力。
3.TUNEL法和流式细胞技术检测细胞凋亡均显示辣椒素和索拉非尼可以增强LM3细胞的凋亡，且二者联合后对细胞的凋亡具有协同促进作用，WB结果显示用药后细胞促凋亡蛋白Bax的表达上调，抗凋亡蛋白Bcl2的表达降低，Cleaved-caspase3，Cleaved-PARP表达上调，且二者存在协同效应。
4.WB结果显示辣椒素和索拉非尼作用于LM3细胞后，细胞自噬水平上升，联合用药组较单药组明显上升。
5.细胞划痕实验结果显示辣椒素和索拉非尼联合应用可以协同抑制LM3细胞迁移；Transwell迁移和侵袭实验结果显示二者可以协同抑制LM3迁移和侵袭作用。WB结果显示用药后E-cadherin水平上升，N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9均下降。
6.WB结果显示辣椒素和索拉非尼联合可以协同下调LM3细胞中EGFR、PI3K/Akt/mTOR信号通路和下游蛋白P-p70s6k。
7.体内实验结果显示：辣椒素和索拉非尼联合可以协同抑制肿瘤生长；用药后四组裸鼠体重无明显区别；用药后肿瘤细胞中凋亡自噬水平上升，增殖、迁移和侵袭相关指标表达下降；用药组和对照组裸鼠肝肾功能无明显差异；HE切片显示用药组与对照组裸鼠肝肾组织结构无明显差异。
结论：
辣椒素和索拉非尼可以抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭，可以促进肝癌细胞的凋亡和自噬，而且二者联合用药可以发挥协同抗肝癌细胞作用。辣椒素和索拉非尼的这种协同抗肿瘤作用可能是因为抑制EGFR、PI3K/Akt/mTOR信号通路引起的。在体内实验中，辣椒素和索拉非尼同样存在协同抗肿瘤的作用，且二者对裸鼠无明显的毒副作用。所以，辣椒素和索拉非尼联合用药有望成为治疗晚期肝癌患者的有效方法。