目的：青光眼(glaucoma)是一组以视神经凹陷性萎缩和视野缺损为共同特征的不可逆性致盲性眼病，其病理基础是视网膜神经节细胞的进行性凋亡。传统的机械学说和缺血学说并不能完全解释青光眼神经退变机理。流行病学显示闭角型青光眼(primaryangle-closureglaucoma，PACG)女性发病率约为男性的2～4倍，发病年龄多在50岁以上。而在原发性开角型青光眼(primaryopen-angleglaucoma,POAG)男性发病率明显高于女性，50岁以后差距变小。这种性别差异是否提示青光眼和性激素的水平之间存在一定的关系?近年研究表明，雌激素对受损的神经元，雌激素可以通过减少小胶质细胞(microglia,MG)氮氧化合物的表达和过氧化物的释放，抑制小胶质细胞的吞噬作用等方面起到有效的神经保护作用。小胶质细胞是视网膜中最具代表性的免疫细胞。近年诸多学者认识到免疫学因素尤其是小胶质细胞参与了青光眼视神经病变的病理生理过程。活化后的小胶质细胞对视神经具有一定的保护作用，但其分泌产物如肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)α等却与视网膜神经节细胞凋亡有密切联系。目前国内外关于雌激素对高眼压作用下的视神经是否具有保护作用及对TNF-α含量的影响未见报道。　　 本实验通过采用前房加压灌注法制成急性高眼压模型，并加以17β-雌二醇(17-βestrαdiol，17βE2)腹腔注射进行干预，应用计算机图像分析技术和免疫组化技术对视网膜神经节细胞和TNF-α的表达进行半定量测定，并应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)对外周血TNF-α的含量进行检测。探讨17β-雌二醇对视网膜神经节细胞的保护作用，从而为临床防治青光眼视神经变性提供实验依据。　　 方法：清洁级健康成年SD大鼠30只，雄性（尽量减少内源性雌激素的影响），无眼疾，体重220士20g。随机分为三组：Ⅰ组为空白对照组10只，Ⅱ组为17β-雌二醇腹腔注射组10只，Ⅲ组为消毒橄榄油腹腔注射组10只。Ⅱ、Ⅲ组均采用前房加压灌注法将左眼制成急性高眼压模型（简称Ⅱ组模型眼、Ⅲ组模型眼），右眼为自身对照眼（简称Ⅱ组对照眼、Ⅲ组对照眼）。10％水合氯醛过量麻醉大鼠，完整取出眼球及眶内视神经，经去除结膜及肌肉组织、固定、取出晶体，再固定、常规脱水、石蜡包埋后切片。应用免疫组化技术分析视网膜视神经节细胞的凋亡及TNF-α的表达。采用计算机图象分析系统对图象中的阳性反应部位进行半定量测定，以平均光密度值(OD)值来表示抗原表达量（注：阳性细胞表现为黄色或棕黄色，平均光密度值越高表示抗原表达量越高）。同时抽取股静脉血3ml凝固后离心取血清，采用ABC-ELISA法测定TNF-α的含量。实验数据均采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，P＜0.05为显著性差异，结果用均数士标准差(Meαn±SD)表示。　　 结果：1视网膜神经节细胞HE染色Ⅰ组大鼠视网膜HE染色可见神经节细胞层细胞大小相似，轮廓规则，核深染，细胞边界清晰；Ⅱ组模型眼神经节细胞层细胞大小不一，轮廓不规则，核深染，细胞边界清晰。Ⅲ组模型眼可见神经节细胞数目明显减少，神经节细胞层呈空泡样改变，部分细胞出现核溶解、核染色浅淡。Ⅱ组、Ⅲ组对照眼神经节细胞数目减少，形态大致正常。2视网膜神经节细胞免疫组化染色（Thy-1.1是大鼠视网膜神经节细胞的特异性标志，本实验采用小鼠抗大鼠Thy-1.1单克隆抗体作为一抗，进行免疫组化染色）　　 Ⅰ组平均光密度值：0.1944±0.0202;Ⅱ组模型眼平均光密度值：0.1265士0.0128，Ⅱ组对照眼平均光密度值：0.1480士0.0107;Ⅲ组模型眼平均光密度值：0.0533±0.0117，Ⅲ组对照眼平均光密度值：0.1019士0.0182。Ⅰ组呈Thy-1.1强阳性染色，其平均光密度值高于Ⅱ、Ⅲ组模型眼及对照眼且均有统计学意义(P＜0.05)。Ⅱ组模型眼染色强度高于Ⅲ组模型眼，且平均光密度值有统计学意义P＜0，05)。Ⅱ、Ⅲ组模型眼阳性染色强度低于自身对照眼，平均光密度值有统计学意义(P＜0.05)。实验结果判定：阳性反应细胞呈黄色或棕黄色。3视网膜神经节细胞TUNEL原位凋亡TUNEL染色阳性的视网膜神经节细胞在三组动物眼球的切片上均可检测到，Ⅰ组及Ⅱ、Ⅲ组的对照眼TUNEL染色阳性强度最弱，阳性细胞比较零散，细胞核多呈圆形、椭圆形，染色较浅。Ⅱ、Ⅲ组模型眼TUNEL阳性染色较强。Ⅰ组平均光密度值：0.0557士0.0118。Ⅱ组模型眼平均光密度值：0.1079士0.0183，Ⅱ组对照眼平均光密度值：0.0878±0.0818。Ⅲ组模型眼平均光密度值：0.2335士0.0128，Ⅲ组对照眼平均光密度值：0.1147士0.0204。Ⅱ、Ⅲ组模型眼平均光密度值高于自身对照眼，有统计学意义(P＜0.05)。Ⅱ组模型眼、Ⅲ组对照眼之间平均光密度值无明显统计学意义(P＞0.05)。实验结果判定：阳性反应细胞核呈黄色或棕黄色。　　 4视网膜TNF-α免疫组化染色视网膜各层均可见阳性染色，以视网膜神经节细胞屡最多见。Ⅰ组平均光密度值：0.5525士0.0116。Ⅱ组模型眼平均光密度值：0.1470士0.0233，Ⅱ组对照眼平均光密度值：0.0776士0.1024。Ⅲ组模型眼平均光密度值：0.1953士0.0175，Ⅲ组对照眼平均光密度值：0.1327士0，0166。Ⅱ、Ⅲ组模型眼呈TNF-α强阳性染色，其平均光密度值高于自身对照眼及Ⅰ组有统计学意义(P＜0.05)。Ⅱ组、Ⅲ组的模型眼及对照眼TNF-α平均光密度值高于空白组有统计学意义(p＜0.05)。Ⅱ组模型眼TNF-α平均光密度值低于Ⅲ组模型眼有统计学意义(P＜0.05)。Ⅱ组模型眼、Ⅲ组对照眼平均光密度值无明显统计学意义(P＞0.05)实验结果判定：阳性反应细胞呈黄色或棕黄色。　　 5ABC-ELISA法测定外周血TNF-α含量Ⅰ组TNF-α含量：12.89士1.86pg/ml。Ⅱ组TNF-α含量：23.76士2.34pg/ml。Ⅲ组TNF-α:40.58士3.87pg/ml。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组外周血血清TNF-α浓度两两间均有统计学意义(P＜0.05)。　　 6两变量之间的相关性分析视网膜中TNF-α的表达与视网膜神经节细胞Thy-1.1的表达负相关，相关系数为-0.897(p＜0.01)。视网膜中TNF-α的表达与视网膜视网膜神经节细胞TUNEL的表达正相关，相关系数为0.851(p＜0.01)。视网膜神经节细胞Thy-1.1的表达与TUNEL的表达负相关，相关系数为-0.865(p＜0.01)。　　 结论：117-β雌二醇可减少急性高眼压作用下视网膜神经节细胞的凋亡，对视神经有保护作用。　　 2前房灌注造成的急性高眼压可引起外周血及视网膜中TNF-α增高。　　 317-β雌二醇能降低急性高眼压作用下视网膜组织及外周血中TNF-α的含量。　　 4TNF-α主要作用于视网膜神经细胞层，并参与了怠性高眼压作用下视网膜神经节细胞的凋亡过程。