蓖麻毒蛋白基因家族干扰载体的构建与低毒蓖麻的遗传转化

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cash625
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
蓖麻毒蛋白是一种主要存在于蓖麻种子中的天然致命性毒素,所有的哺乳类动物摄入过量的蓖麻毒蛋白,都会导致休克致死现象。脱油后的蓖麻饼粕中含有各种营养物质和大量的蛋白质,但因蓖麻毒蛋白的存在而不能直接配合饲料生产,必须经过脱毒处理,而脱毒过程中不但会流失饼粕中的营养物质同时也会造成资源浪费。因此利用RNA干扰技术阻断蓖麻毒蛋白合成,从而获得低毒蓖麻新品系,这为综合利用蓖麻饼粕以及提高蛋白质综合利用率提供了一条十分可行的途径。本研究首先分析了蓖麻毒蛋白前体基因的时空表达模式,然后寻找出蓖麻毒蛋白家族中的23个成员,并将其聚类分为7亚类,并选取每个亚类中高度保守区域的序列片段,连接成为RICIN融合片段,构建RNA干扰表达载体并进行遗传转化,获得以下研究结果:1、根据蓖麻基因组数据库中蓖麻毒蛋白前体基因(XM002534603.1)序列,提取所有的同源序列,并从中选取了22个具有完整读码框序列进行BLAST分析,根据比对结果,以高度保守区域序列为模版,设计了蓖麻毒蛋白前体基因表达检测的引物对。2、确定了蓖麻毒蛋白前体基因的表达谱及特征通过定量和半定量PCR检测,发现苗期的根、茎、真叶和子叶中没有表达;在开花期的成熟组织中,只在种子和根中有明显表达;在蓖麻雌花授粉后,蓖麻种子的不同发育阶段,蓖麻毒蛋白前体基因的表达具有明显特征:授粉后第1至3天有表达,之后表达停止,一直到授粉后第24天,蓖麻毒蛋白前体基因又重新开始表达,并且表达量急剧上升。3、将23个蓖麻毒蛋白家族成员依次命名为RC-1至RC-23并将其基因序列进行聚类分析,分为7个亚类,分别为:sub-groupl (RC-2、4、5、7、11), sub-group2(RC-1、6、9、10、12), sub-group3(RC-3、8和13), sub-group4(RC-15和RC-23), sub-group5(RC-18、19、20、21和22), sub-group6(RC-14和RC-17), sub-group7(RC-16)。4、分别克隆每个亚类中高度保守区域的序列片段:sub-group1(400bp), sub-group2(182bp), sub-group3(100bp), sub-group4(185bp), sub-group5(143bp), sub-group6(126bp), sub-group7(324bp),并将7个片段连接成为一个融合片段RICIN。将融合片段RICIN正反方向插入pFGC1008载体中,构建了蓖麻毒蛋白家族基因的RNA干扰载体,同时沉默蓖麻毒蛋白家族成员基因。5、通过蓖麻遗传转化体系:以黑暗条件条件下预培养5天的种子胚轴为外植体,经OD600值0.2-0.5的农杆菌重悬液浸染10min并共培养3天后,转至20mg/L潮霉素浓度培养基中进行筛选。从种子萌发到诱导抗性苗生根的过程需要约75天。抗性苗通过PCR检测证明为转基因植株。用该转化体系转化蓖麻,共筛选得到抗性苗97株,其概率为6.93%,获得1株转基因苗,转化率为0.07%。
其他文献
为了研究循环流化床下行床蒸发的传热特性和压降特性,建立了一套循环流化床下行床蒸发装置。选择POM1、POM2、POM3、POM4和GB,SiC六种固体颗粒作为惰性固体颗粒,在加热的条件下,考察了颗粒的种类,颗粒的粒径对流动沸腾传热系数,传热增强因子和压降的影响。同时也考察了颗粒加入量(0.5%≤e≤2%)、循环流速(0.56–1.78 m/s)和热通量(8 kW/m2≤q≤16 kW/m2)对三相
近年来,随着深海领域资源开采不断加快,越来越多的抗拔基础作为上部结构的锚固形式被采用。结构物在黏性地基中上拔时不可避免要承受到地基与结构物间的吸附力作用,包括负孔隙水压力、黏附力、侧摩阻三部分。吸附力的大小决定了抗拔结构物的稳定性以及吊装设备、工法的选择,从而深刻影响到工程安全和经济效益,因此有必要对其进行研究。本文的主要工作和结论如下:(1)通过固结试验研究了土体固结系数随着固结压力的变化。固结
看麦娘属(Alopecurus)隶属于禾本科,为一年生或多年生草本,世界约有50种,主要分布于北半球的寒温带,在我国分布有8种。关于看麦娘属(Alopecurus)的系统学位置一直以来都存在很大
金融危机造成了全球全要素生产率持续下降、实体经济低迷,需要持续创新提振实体经济发展。然而我国资源错配问题造成了实体企业的成本攀升和绩效降低,创新行为的成本和收益不对称性加大,持续创新存在很大的间断性。同时,经过几十年的“经济金融化”发展,金融对实体经济不断“疏远”,造成实体经济部门与金融部门赚取利润的内生机制不平等,巨大的资产回报率偏离使得大量实体资本涌入高资产回报率的泛金融部门,进一步造成实体企
随着习总书记在2017年的国家金融会议上作出指示,加强金融行业供给侧结构改革。一批批财政专项扶贫资金、消费贷款资金、购车专项资金的投入和项目的实施,有效的推动了各项金融工作的进行,成效明显。作为具有普惠金融性质的银行专项消费贷款,较其他类信用贷款有着收益高、风险低、有特定的消费场景及较固定的贷款用途等特点。项目实施的效果一直是商业银行和民众关注的焦点。本文结合财政支出评价方法及管理会计中平衡计分法
本研究以5种不同来源的野生狼尾草为试验材料,分别在种子萌发期和幼苗生长期进行干旱胁迫和盐胁迫,研究5种野生狼尾草在干旱或盐胁迫下的种子萌发情况和幼苗期的生理生化指标
微混合器的通道尺寸一般在微纳尺度(当量直径小于1 mm)。这种设备具有很大的表面积/体积比值,能够促进流体在通道中快速混合,使得微混合器在有机合成、液液乳化、高通量筛选以及生命科学领域均有广阔的应用前景。微混合器根据输入能量方式分为主动式和被动式微混合器,前者依靠外界能量扰动流体进行混沌混合,但加工困难,成本较高;后者除了需要提供流体流动的能量外,不再需要其他外在的动力,因此成为微混合器研究热点。
如今,环境污染日益严重,石化能源日益短缺,世界人口日益增长,人均资源占有量越来越少,这些因素都大大限制了高消耗、高污染的发展方式,迫使人们不得不开始改革,寻求新的发展
磁悬浮储能飞轮系统因其功率密度高、应用范围广、使用寿命长等特点,在储能领域得到了广泛地关注和研究。而飞轮电机作为该系统最主要的部分之一,它的控制品质关系到整个系统的性能。由于永磁同步电机具有结构简单、效率高、损耗小等特点,得到了众多研究人员的青睐。一般情况下,永磁同步电机的驱动控制需要利用位置传感器获取转子位置和转速等相关信息,但由于位置传感器的安装会提高控制系统的成本,还可能会降低系统的可靠性。
卡特尔违法行为是最广泛的破坏市场秩序的反竞争行为,但由于卡特尔的隐蔽性,反垄断执法机构很难发现和查处该行为,反垄断执法往往会陷入僵局。为此,美国首次提出了宽大制度,极大提高了查处卡特尔案件的效率。我国也在2008年《反垄断法》中对宽大制度作出规定,但是该规定表述非常笼统,可操作性不强。2016年国家发改委发布了《横向垄断协议宽大制度适用指南(征求意见稿)》,对我国宽大制度的适用对象、程序等作出了较