化学方法构建细胞—大分子偶联物并实现原位定量检测

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在恶性肿瘤的治疗方面,免疫治疗成为攻克癌症的希望之一,增强免疫系统对肿瘤细胞的识别,是肿瘤免疫治疗的关键点,例如,CAR-T和PD-1/PD-L1,都是解决了T细胞对肿瘤细胞的识别问题。但是目前的免疫治疗技术,在实体瘤方面有很大的局限性。基于此我们设计一种“与”门式荧光探针LS,荧光探针LS上带有可进行点击化学反应的基团:DBCO与降冰片烯,利用肿瘤细胞特异性表达或过表达的酶,对肿瘤细胞可控修饰和定量追踪,实现肿瘤细胞表面构建新的大分子偶联物,实现原位检测,为肿瘤细胞引入可被免疫系统识别的新靶标提供一种可视化手段。因此,我们设计了带有双苯并环辛炔与降冰片烯的荧光探针LS,并研究了它的光学性质。主要内容如下:1.第一部分工作是针对荧光探针LS的合成,以及四嗪与四嗪PEG的合成2.第二部分工作是荧光探针LS分别与叠氮和四嗪小分子、叠氮和四嗪大分子的点击化学反应,收集光谱数据。当荧光探针LS分别与叠氮或四嗪分子进行点击时荧光不会增强;当荧光探针LS同时与叠氮和四嗪分子点击时,荧光增强。实验证实,只有当荧光探针LS上的DBCO和降冰片烯都反应,荧光探针LS才会显示荧光增强的效果。3.第三部分工作是将荧光探针应用在肿瘤细胞。用带有叠氮基团的非天然糖培养肿瘤细胞,使肿瘤细胞表面带有叠氮基团。然后将荧光探针LS与四嗪PEG加入到细胞培养基里面孵育,最终观察到,在肿瘤细胞表面带有一层红色荧光物质。实验证明,荧光探针LS能够标记肿瘤细胞表面。
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