1,提取JM10大肠杆菌菌毛,经12%的聚丙烯酰胺凝胶电泳.切取菌毛蛋白条带制成油乳剂抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选获得2株能稳定分泌针对1型菌毛的单克隆抗体杂交瘤细胞株。单抗阻断甘露糖敏感血凝试验和Westernblot试验证明,这两株单抗都是1型菌毛特异的。这2株单抗的直接凝集价分别为2⁵～2⁶、2⁸～2⁹,ELISA效价分别为10³、10⁴～10⁵。应用这2株单抗对46株带1型菌毛的禽病原性大肠杆菌优势血清型分离株进行了检测,单抗可以快速,简便的鉴定致病性的分离株,同时还可为后来的抗原性检测试验提供标准菌毛抗体。 2.根据人大肠杆菌的pilA序列设计一对引物,从基因组中扩增大小为551bp目的基因pilA,定向克隆到T载体质粒,测序,然后克隆到表达载体pET-32a（+）中。阳性重组质粒转化至BL21（DE3）中,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,接着,对此重组菌株的表达条件从表达的情况、表达时间、IPTG的浓度等各方面进行优化.从而确立高效表达的条件。利用镍柱,提纯JM10菌株1型菌毛结构基因的重组蛋白。通过间接ELISA和Western-blot方法,与相应的单抗4D3和相关血清型O₇₈的单抗和血清型O₁₈的多价抗血清反应,试验结果证实该重组pilA基因重组蛋白具有菌毛蛋白的抗原性,存在交叉反应,进一步的说,1型菌毛之间存在相同的抗原位点,有一定的相关性。 3.将提纯的重组蛋白和天然菌毛疫苗免疫小鸡,第三周,用同源致病性菌株气囊攻毒。同时设立非免疫鸡只攻毒对照,和非免疫非攻毒对照。观察鸡只的情况。攻毒4日后,非免疫攻毒组87.5%死亡。重组菌毛免疫组死亡率为25%,天然菌毛免疫组死亡率仅为12.5%,而天然菌毛疫苗的保护率高达87.5%。所有试验组鸡群剖解,从肝、心和气囊等部位观察机体的病理变化,免疫攻毒的两组鸡群且在肝脏、心包、气囊的病变比未免疫鸡显著轻微,重组菌毛免疫组比天然菌毛免疫组症状显著。从而说明,重组蛋白具有免疫保护作用。重组菌毛疫苗的保护力比天然菌毛疫苗低。