被子植物具有独特的双受精现象，姊妹精细胞中的一个与卵细胞结合发育成胚，另一个与中央细胞结合发育成胚乳。受精过程中，精细胞通过花粉萌发的花粉管进入胚囊，继而完成双受精。整个受精过程都是在由体细胞形成的花柱、子房和胚珠内完成。因而对于研究受精机理问题形成了障碍。将高等植物的精、卵细胞和其他胚囊细胞分离出来，运用离体诱导精、卵细胞融合并且对人工合子进行离体培养再生植株的离体受精技术，将克服体细胞组织对受精过程研究的障碍，从而进行细胞和分子水平的研究，达到揭示被子植物受精机理的目的。本实验中我们尝试分离土烟叶和洋葱具有生活力的精细胞和卵细胞，为进一步研究土烟叶和洋葱雌、雄配子体的分子生物学特性及受精机理等提供了条件。　　 土烟叶精细胞分离:土烟叶花粉为二胞型，精细胞在花粉管中形成。通过直接爆破法、离体培养花粉法分离出了土烟叶生殖细胞。然而在离体培养的花粉管中，土烟叶生殖细胞并不分裂形成精细胞。采用半离体培养法（先将花粉在柱头上授粉并在体内生长一段时间后切下花柱进行离体培养，从花柱中诱导出花粉管）成功地分离了精细胞。　　 土烟叶卵细胞的分离:将土烟叶胚珠先在酶液中酶解10min，然后转移到不含酶液的分离液中，用解剖针从其合点端横切胚珠，轻轻挤压珠孔端即可使卵器细胞和中央细胞从切口处逸出。用这种酶解-解剖方法分离了土烟叶胚囊中的卵细胞、助细胞和中央细胞。通常一小时可分离8-12个卵细胞。分离的卵细胞用显微操作仪收集。土烟叶精、卵细胞的成功分离可在分子水平上研究其精、卵细胞的发育过程并为开展双子叶植物离体受精实验创造了条件。　　 洋葱精细胞分离:洋葱的精细胞属于二胞花粉，直接爆破法可以收集到大量的活性生殖细胞。采用完全离体培养花粉的方法，将洋葱成熟花柱放置在培养液中，会促使柱头附近的少许花粉粒萌发形成花粉管，但花粉管在各种渗透压梯度下几乎均不发生爆破。采用半离体培养的方法，将体内生长23小时授粉花柱切下，体外培养24小时，可从花柱切口部位诱导出花粉管，爆破花粉管可以获得成对的精细胞。　　 洋葱卵细胞分离:将洋葱的胚珠置于酶液中酶解50～110min后剥去其珠被，可清楚地看到珠心中的胚囊轮廓。用解剖针将珠心从中部横切，然后挤压其珠孔部位，卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪的玻璃针将卵细胞和两个助细胞分开，达到分离洋葱卵细胞的目的。酶对分离卵细胞具有重要作用，在最佳的酶液（0.02％果胶酶Y23，0.08％果胶酶，0.05％纤维素酶和0.05％半纤维素酶）中酶解胚珠110分钟后，解剖1h可从24个胚珠中分离出10个卵细胞(41.67％)。随着胚囊的发育，两个助细胞的体积出现明显的二形性。通过洋葱生活卵细胞和精细胞的分离为开展洋葱离体受精建立了基础，也为研究洋葱卵器细胞的发育创造了条件。