酒依赖与正常对照大鼠脑组织miRNa-9表达差异性研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lzhongyue
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目的:分析酒依赖大鼠戒断评分;比较酒依赖大鼠与正常对照大鼠之间的体重差异;比较酒依赖大鼠脑组织中miR-9与正常对照大鼠的差异表达。  方法:选取38只健康成年雄性wistar大鼠(体重200~280g),利用随机数字表随机分为两组,对照组14只、酒依赖组24只,酒依赖组采用反复酒精灌胃的方法建立酒依赖动物模型,对照组用与酒依赖组灌胃酒精热量相等的蔗糖水灌胃。用蒸馏水、无水乙醇配置成50%(w/v)乙醇溶液,每天灌胃2次,每次间隔7~8h,连续灌胃12周。灌胃总酒精量逐渐达到10.0g/kg/d,采取剂量递增方法,第一周给予2.0g/kg灌胃,每周增加剂量4.0g/kg,达到10.0g/kg/d后持续灌胃达到12周。实验期间每周对大鼠进行称重,至实验结束。灌胃12周后对大鼠进行戒断评分并记录,之后用10%水合氯醛按5ml/kg腹腔注射麻醉大鼠后迅速断头取脑,在生理盐水冰面上分离大脑组织,将脑组织标本至液氮速冻,-80℃保存。采用miRNA提取试剂盒提取miRNA,溶于焦碳酸二乙酯(DEPC)水中并于-80℃保存。采用quantitative Real-Time PCR(qRT-PCR)检测两组大鼠脑组织miRNA-9的表达量。  结果:  1.灌胃12周停酒依赖组和正常对照组戒断评分在2、4、6、24及48小时分别为(14.33±2.20),(15.08±1.99),(15.75±1.82),(12.96±1.62),(5.92±1.21);(1.78±0.69),(1.92±0.61),(1.64±0.49),(1.50±0.51),(1.28±0.46)。P<0.01,差异显著。  2.造模结束时对照组大鼠体重(352.9±34.2)g与酒依赖组大鼠体重(311±33.7)g相比较,差异显著(P<0.01);对照组大鼠平均增长体重(112.5±30.1)g与酒依赖组平均增长体重(57.5±32.9)g相比,差异显著(P<0.01)。  3.用qRT-PCR方法检测了酒依赖组和正常对照组大鼠脑组织中miR-9的表达水平,以U6做内参。根据公式计算R=2-△△Ct,△△Ct=△Ct酒依赖组—△Ct对照组,△Ct=(CtmiR-9—CtU6)。得出酒依赖组大鼠较正常对照组miR-9表达明显上调,有统计学意义(P<0.05)。  结论:  1.大鼠在长期高浓度饮酒后突然停饮,24小时内会表现出严重的戒断症状,6h达到最高。  2.长期摄入高浓度酒精会导致大鼠体重增长缓慢甚至是减轻。  3.酒依赖大鼠脑组织中miR-9的表达明显上调。
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