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幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是一种定居于人胃部及十二指肠的微需氧的革兰氏阴性菌,是消化性溃疡、慢性活动性胃炎、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤及胃癌等消化道疾病的发生与复发的主要致病因素之一，世界卫生组织(WHO)已将其列为I级致癌物质。全世界约有半数以上的人口感染Hp，我国是Hp感染高发国家，因此Hp检测具有重要的现实意义。本文选用哥伦比亚血琼脂培养基成功培养Hp菌株NCTC11637（ATCC43504），通过超声裂解，获得Hp全菌抗原。并通过PCR扩增目的基因尿素酶B（UreaseB）和热休克蛋白（Hsp60），成功构建pET28a-UreaseB和pET22b-Hsp60质粒，然后将其转入E. coli BL21（DE3）中进行蛋白的诱导表达，亲和纯化得到重组UreaseB和Hsp60蛋白，用于后续单克隆抗体的筛选与鉴定。利用Hp全菌抗原免疫Balb/c小鼠，四次免疫后用Hp全菌抗原测定小鼠血清抗体效价，效价达到要求后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合制备杂交瘤。以Hp全菌蛋白和重组Hsp60以及Urease B作为抗原进行间接酶联免疫吸附测定（ELISA）筛选，经多次有限稀释法亚克隆得到21株稳定分泌抗Hp全菌抗原的杂交瘤细胞株，制备腹水并用辛酸硫酸铵联合沉淀法或Protein G柱亲和层析法纯化得到单克隆抗体。将得到的IgG单克隆抗体进行HRP标记，以Hp全菌作为抗原，在ELISA平台上进行配对，共产生46对抗体搭配，最低能检测到0.1μg/ml Hp抗原。将IgG抗体在胶体金免疫层析分析（GICA）平台上配对,有37对发生阳性反应，其中2-18E1抗体作为包被抗体，2-9H5或2-17E9作为标记抗体时具有相对最好的灵敏度，灵敏度可达25ng/mL,为Hp抗原检测试剂的开发提供了基础。