【摘 要】
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该研究拟建立红三叶草的遗传转化体系,为利用基因工程手段有目的地提高或控制其中异黄酮的含量奠定基础.再生体系的好坏是评价遗传转化体系的关键因子之一.该研究建立了子叶
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该研究拟建立红三叶草的遗传转化体系,为利用基因工程手段有目的地提高或控制其中异黄酮的含量奠定基础.再生体系的好坏是评价遗传转化体系的关键因子之一.该研究建立了子叶叶柄与下胚轴的快速再生体系,在含有(6-BA1.5mg/1)的培养基上再生率达到80﹪左右,再生的最好的基本培养基为B<,5>培养基.植株的再生历程只需要30-40天,这比一般由愈伤诱导方法得到再生植株的时间缩短1-2个月.但从根、叶柄愈伤进行再生未研究出理想的条件.红三叶草转化体系的建立是对普通农杆菌浸润法、真空法、表面活性剂法、及真空法与表面活性剂法相结合的方法进行了比较,发现真空法与表面活性剂法相结合的方法转化率最高,达14﹪.转化的植株先在含有B<,5>6-BA1.5mg/1:Km30mg/1:Cb500mg/1的培养基上筛选一个月,并用Gus组织染色法作初步鉴定.进而阳性植株再在含NAA0.5mg/1的B<,5>培养基上生根培养一个月后,可见转化苗生根,三个月可见健壮的成株.在转化植株的GUS检测表明,筛选生长一个月的植株叶片和叶柄有着高表达,两个月后包括根在内则不见表达.这可能与豆科植物中Gus抑制酶的存在有直接关系.但是对生长两个月的转化苗进行Southern杂交显示,GUS基因已整合到植物基因组中.
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