RNA干扰survivin基因对HepG2细胞凋亡及化疗的影响

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目的:观察RNA干扰技术抑制人肝癌HepG2细胞survivin基因表达后对其细胞增殖及对其化疗敏感性的影响,探讨RNA干扰survivin基因表达对于肝癌治疗的可行性。方法:构建针对人肝癌HepG2细胞survivin基因靶序列的shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-387,应用Lipofectamine2000脂质体介导转染法转染质粒,后分别行以下的研究:(1)将HepG2细胞接种于6孔板中,分为5组:空白对照组(不加药物)、阴性对照组(3.2ugpshRNA-survivin-NC/孔)、低浓度转染组(0.8ugpshRNA-survivin-387/孔)、中浓度转染组(1.6ug pshRNA-survivin-387/孔)、高浓度转染组(3.2ug pshRNA-survivin-387/孔),作用48h后收集细胞,流式细胞术检测各组细胞凋亡指数。(2)将HepG2细胞接种于96孔板中,分为三组:空白对照组(不加药物)、阴性对照组(0.2ugpshRNA-survivin-NC/孔)、实验组(0.2ug pshRNA-survivin-387/孔),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞分别于顺铂(2.0ug/ml)作用24h,36h,48h,60h后的增殖水平。结果:(1)各浓度转染组细胞的凋亡指数明显高于空白对照组和阴性对照组(与空白对照组比较, F=228.87,*q=14.21-38.21,p<0.01;与阴性对照组比较,#q=10.45-34.4,p<0.01),高浓度转染组细胞凋亡指数高于低浓度转染组(F=228.87,q=23.99,p<0.01)。(2)顺铂对实验组细胞的细胞抑制率在24h,36h,48h,60h时明显高于空白对照组和阴性对照组(F=235.88-910.86,q=28.04-52.28,p<0.01)。结论:pshRNA-survivin-387转染能显著诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡,增加人肝癌HepG2细胞对顺铂(C-DDP)化疗的敏感性。
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