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乙型肝炎病毒是一种具有嗜肝性的,不引起细胞病变的DNA病毒,大约5-10%的成人感染和90-95%的新生胎儿感染会转为持续的感染。这些持续的感染人群具有极大地危险转化为慢性肝炎,肝硬化甚至肝癌。乙型肝炎病毒侵染导致的疾病已经成为了一种世界范围内的主要健康问题。虽然治疗性的核苷类似物和干扰素被用于乙型肝炎病毒感染者的治疗,但是乙型肝炎感染者人数和乙型肝炎相关的死亡人数逐年递增。因此,发展新的治疗药物或备选资源十分重要。本实验室近期从蝎毒腺cDNA文库中筛选得到了一些阳离子宿主防御肽基因。根据这些基因序列化学合成多肽,并且测试了它们的抗乙型肝炎病毒活性。结果发现细尖狼蝎活性多肽Mucroporin-M1能够有效的抑制乙型肝炎病毒表面抗原和早期抗原的表达。因此,对蝎活性多肽Mucroporin-Ml的抗HBV作用进行了进一步的研究。首先在乙型肝炎病毒稳转细胞系HepG2.2.15中检测了Mucroporin-M1对乙型肝炎病毒复制的抑制效应。结果显示,Mucroporin-M1能够浓度依赖性的抑制乙型肝炎病毒表面抗原,早期抗原以及病毒子代DNA在细胞上清中的表达和复制。与此同时,在HepG2.2.15细胞内,Mucroporin-M1抑制HBV的DNA, RNA复制中间体以及Core蛋白质的表达,并且这种细胞内的抑制效应也具有浓度依赖性。由于Mucroporin-M1多肽在肝癌细胞系内具有抗乙型肝炎病毒活性,进一步检测了其多肽在乙型肝炎病毒急性感染小鼠体内的活性。实验结果证实了蝎活性多肽Mucroporin-M1能够有效减少小鼠血液内的乙型肝炎病毒表面抗原与早期抗原,同时还能够显著抑制小鼠肝脏细胞内的乙型肝炎病毒复制。Mucroporin-M1多肽在细胞和动物水平上抗HBV效应结果提示,Mucroporin-M1多肽作用于乙型肝炎病毒复制的转录阶段,而不是乙型肝炎病毒的DNA多聚酶反转录阶段,这区别于现有的乙型肝炎病毒治疗性核苷类似物。鉴于此,检测了Mucroporin-M1对乙型肝炎病毒的启动子活性,结果表明Mucroporin-M1多肽能够以浓度依赖的方式有效抑制乙型肝炎病毒启动子的转录活性。另外,采用EMSA实验研究了Mucroporin-M1是否影响宿主细胞核转录因子与乙型肝炎病毒启动子的结合,从而产生其抑制乙型肝炎病毒启动子转录活性。结果显示,Mucroporin-M1明显降低了肝转录因子4α (HNF4α)与乙型肝炎病毒preCore/Core启动子的结合。Mucroporin-M1多肽降低了HNF4α与乙型肝炎病毒preCore/Core启动子的结合解释了Mucroporin-M1多肽对乙型肝炎病毒转录的抑制作用。进一步通过实时定量PCR和Western Blotting分析发现,Mucroporin-M1在乙型肝炎病毒复制的HepG2.2.15细胞内浓度依赖抑制HNF4α的表达。因此,Mucroporin-M1多肽通过抑制HNF4α的表达,进而减少HNF4α蛋白与乙型肝炎病毒preCore/Core启动子的结合,从而对乙型肝炎病毒的转录发挥抑制效用。Western Blotting进一步分析表明,Mucroporin-M1激活了有丝分裂原激活的蛋白激酶通路(MAPKs),下调HNF4α表达,从而抑制乙型肝炎病毒的复制。而且MAPKs通路的特异性抑制剂在乙型肝炎病毒复制的HepG2.2.15细胞中能够阻断蝎活性多肽Mucroporin-M1激活蛋白激酶通路、抑制HNF4α表达和HBV的子代DNA复制。与此同时,在乙型肝炎病毒感染小鼠体内,Mucroporin-M1也能够显著激活MAPKs通路。综上所述,本研究发现Mucroporin-M1能够通过激活MAPK通路,下调乙型肝炎病毒复制所必需的转录因子HNF4α的表达。由于HNF4α的表达被下调,乙型肝炎病毒的启动子活性也被抑制,从而导致乙型肝炎病毒的RNA转录被抑制。结果,以病毒RNA为复制模板的病毒子代DNA和蛋白质也被抑制。在乙型肝炎病毒感染的小鼠中,鼠肝和血液中的病毒滴度被Mucroporin-M1多肽有效降低。Mucroporin-M1多肽在小鼠体内抑制乙型肝炎病毒的复制可能与MAPK通路的激活有关。研究表明Mucroporin-M1在细胞和动物水平上能够有效地抑制乙型肝炎病毒复制,其抗乙型肝炎病毒的分子机制是通过激活MAPK通路,抑制HNF4α表达,从而抑制HBV的启动子转录活性,最终抑制病毒的复制。