电压依赖性阴离子通道蛋白(VDAC)是线粒体外膜上最丰富的蛋白，在调节线粒体的物质代谢与能量代谢、以及线粒体介导的细胞凋亡中起重要作用，因而与肿瘤及神经退行性疾病的发生密切相关。VDAC1是三种VDAC变体中表达量最高、分布最广泛的一种。VDAC1的二级结构包含19个β折叠链组成的β桶结构，以及N端的一个α螺旋，其N端的结构对功能影响很大。由于VDAC1的高度保守性，因此成为多种疾病治疗包括抗肿瘤治疗的理想靶点。积雪草酸(Asiatic acid，AA)是三萜酸类化合物，我国传统中草药积雪草中的主要活性成分，具有抗氧化、抗炎症、保护肝脏、保护神经等药理活性。但目前的研究并未能阐明AA的作用机制及其作用的靶点。已有研究显示AA能够逆转鱼藤酮引起的VDAC1寡聚化，表明AA的药理活性可能与VDAC1相关。　　本研究主要从体外方面研究AA与VDAC1之间的关系。获得足量的VDAC1蛋白是研究其与AA相互作用的基础。首先，我们尝试从大鼠肝脏中直接分离纯化VDAC1，但是操作步骤相对繁琐、条件苛刻，而且提取得到的蛋白得率和浓度都很低。尝试浓缩没有成功。后改用DNA重组技术在大肠杆菌中重组表达VDAC1以获得足量蛋白、用于后续研究。我们成功地构建了C端带有His-tag的hVDAC1的重组蛋白原核表达质粒pET28a/hVDAC1，并同时构建了分别截去N端8个氨基酸和22个氨基酸的hVDAC1截短体N9、N23的表达质粒pET28/hVDAC1-N9、pET28/hVDAC1-N23。三种蛋白在大肠杆菌中部以包涵体形式表达，收集包涵体后通过盐酸胍变性、在变性条件下通过NTA-Ni亲和层析柱纯化蛋白、再透析复性，获得了纯度较高的三种重组蛋白。圆二色谱(CD)检测显示三种蛋白二级结构都以β-折叠为主、符合hVDAC1膜蛋白的二级结构特征。利用流式细胞仪检测结果显示:FITC荧光标记的hVDAC1蛋白及其截短体都可以与脂质体膜、细胞膜特异性结合。上述结果证明我们克隆表达纯化的hVDAC1及其截短体具有膜蛋白的结构和功能特征。运用等温滴定量热法和微量热泳动法检测AA与hVDAC1蛋白的直接相互作用，没有得到阳性结果。流式细胞仪检测结果显示:AA可以促使脂质体外的荧光素FITC进入脂质体，且具有浓度依赖性，但是这种作用与脂质体是否包含hVDAC1蛋白无关，提示AA可能直接作用于脂质体，造成脂质体膜通透性改变。为了在细胞水平上进一步研究hVDAC1的作用，我们构建了hVDAC1与EGFP融合表达的真核表达质粒pcDNA3.1-/hVDAC1-EGFP，转染293T细胞后，发现hVDAC1-EGFP可以表达并主要定位于线粒体。上述工作为进一步研究hVDAC1的结构与功能、构建体外筛选与hVDAC1相互作用的各类分子的平台奠定了一定的基础。