β-葡萄糖醛酸苷酶催化选择性定向调控研究

来源 :北京理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shijianwu2003
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酶促反应己经在诸多领域展现出不可替代的作用,对酶促反应进行调控,特别是对其选择性进行定向调控越来越为人所关注。本论文以β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)为研究对象,以其催化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)和甘草次酸(GA)为模式反应,探讨了PGUS-E的定向调控策略,取得了如下主要研究结果:(1)采用大分子修饰、小分子修饰等不同修饰方法对PGUS-E进行化学修饰,考察不同修饰方法对β-葡萄糖醛酸苷酶选择性的催化选择性的影响。发现DTNB溶液修饰后的酶对GAMG的选择率最高为65%,通过对修饰反应过程中DTNB的浓度和修饰反应时间的优化,最终得到20mmol/L的DTNB溶液修饰反应20分钟时得到的酶PGUS-E-D,选择率最高为74%。(2)选用铁磁性纳米粒子固定化PGUS-E-D,300μL酶液加入10mg铁磁性纳米粒子,在pH为4.0,20℃条件下固定化3h得到的固定化酶酶活最高为212U/g,与对照相比降低了6.19%,将其并命名为PGUS-E-DFe。固定化酶PGUS-E-DFe对GAMG的选择率为58%,与未修饰的PGUS-E相比提高了41%,与游离酶PGUS-E-D相比降低了21.62%。(3)考察了有机介质单相体系和有机介质-水双相体系对β-葡萄糖醛酸苷酶活性及选择性的影响,结果发现在有机介质单项体系中,酶的酶活与对照相比非常低,仅有对照的25%左右。在有机介质-水双相体系中,含水量为30%时,酶的酶活与对照相比损失60%左右;含水量为50%时,酶的酶活损失50%左右;而含水量为70%时,酶的酶活与对照相比损失较少。考察了含水量为70%水-乙酸乙酯两相体系中酶的最适温度与最适pH,分别为35℃和5.5,对GAMG的选择率最大为56%。
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