电化学生物传感器是基于生物识别的高度专一性发展起来的一种分析技术,具有选择性好、灵敏度高、分析快速、成本低、能在复杂的体系中进行在线连续监测的特点,在环境监测、临床诊断、农残分析、食品药品工业等领域具有广泛的应用前景。在电化学生物传感器的研制中,一个关键的技术就是如何将生物材料稳定、高活性地固定到基体电极表面,构成生物传感器的敏感膜。针对生物传感器固定技术中存在的问题,本研究工作致力于发展新型生物材料固定方法,以达到改进固定生物材料性能、延长传感器使用寿命等目的,本论文主要研究工作包括:1.在第2章中,报道了一种新型脲酶传感器。以胺化PVC(PVC-NH2)作基质的PVC膜pH电极为原电极,首先采用戊二醛将伴刀豆球蛋白交联到pH电极上,再利用伴刀豆球蛋白(Con A)与糖蛋白间的特异性识别作用,将Con A和酶表面的麦芽糖残基结合采用交替沉积Con A和脲酶进行多层酶膜的组装,电极在尿素浓度为6.9×10-5 ~1.0×10-3mol L-1范围,响应电位与尿素浓度的对数值间呈线性关系,检测下限为4.5×10-5 mol L-1。与戊二醛交联固定酶法比较,Con A能较好的保持酶的活性。传感器用于牛奶中尿素回收率的测定,结果令人满意。2.重金属离子对脲酶的抑制作用是不可逆的,因此基于对脲酶抑制来检测汞离子的传感器在多次与抑制剂接触后,很难使用再生溶液将脲酶的活性完全恢复,有必要研究一种可更新的脲酶传感器。在第3章中,提出了一种基于自组装纳米金的可更新的抑制型汞离子传感器,其基础电极为胺化-聚氯乙烯(PVC-NH2)膜pH电极。首先将纳米金组装在含有中性载体DAMAB的PVC-NH2膜表面,然后通过化学吸附作用将脲酶固定在纳米金上制得脲酶电极并用于检测汞离子。电极对汞离子响应的线性范围为0.09 ~ 1.99μmol L-1,检测下限为0.08μmol L-1。自组装固定的一个有利之处就是在传感器表面被Hg2+变性的失活酶层和纳米金层能通过强酸强碱溶液去除干净,并可重新进行下一循环的酶自组装。3.在第4章中,首次研制出一种基于纳米ZnO/壳聚糖有机-无机复合膜作为固定基质的电化学酶联免疫生物传感器。该复合膜结合了无机材料纳米ZnO和有机材料壳聚糖的优点。抗体的固定基于纳米ZnO的吸附作用,因此避免了化学损伤。为了考察方法的可行性,选用羊抗人IgG和人IgG为模型,HRP为酶标记物,检测人IgG。通过扫描电镜观察到纳米ZnO/壳聚糖膜呈多孔状,纳米颗粒有效地增加了电极的面积,使抗体高效地固定在电极表面。其线性范围为