【摘 要】
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目的本实验通过高菌量牙龈卟啉单胞(Porphvromonasgingivalis.P.gingivalis)W83感染小鼠口腔的方法建立牙周炎动物模型,采用腹腔注射GITR抗体阻断抑制Treg细胞功能,观察Treg细胞对牙周炎中M2型巨噬细胞介导的免疫应答的影响。方法选用20只7周龄雌性SPF级C57bl/6小鼠,按每组5只随机分为4组:正常对照组、单纯牙周炎组、Ig G组、和anti-GITR
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目的本实验通过高菌量牙龈卟啉单胞(Porphvromonasgingivalis.P.gingivalis)W83感染小鼠口腔的方法建立牙周炎动物模型,采用腹腔注射GITR抗体阻断抑制Treg细胞功能,观察Treg细胞对牙周炎中M2型巨噬细胞介导的免疫应答的影响。方法选用20只7周龄雌性SPF级C57bl/6小鼠,按每组5只随机分为4组:正常对照组、单纯牙周炎组、Ig G组、和anti-GITR m Ab组,连续7天口腔内涂抹P.gingivalis W83(1x10~9/d)建立牙周炎动物模型,anti-GITR m Ab组小鼠于P.gingivalis W83涂抹第1天开始,每隔3天腹腔注射anti-GITR m Ab(100mg/mouse),共4次,Ig G组小鼠腹腔注射Ig G同型对照抗体(100 mg/mouse)。动态监测4组小鼠体重变化,于第45天取材,解剖显微镜下观察4组小鼠牙龈指数和牙齿松动度;测量从釉牙骨质界(cemento-enamel junction,CEJ)到牙槽嵴顶(alveolar bone crest,ABC)的距离来评价牙槽骨的吸收情况;苏木素-伊红(Homatxylin and eosin,HE)染色法观察牙周组织中炎细胞浸润、结缔组织附着丧失以及牙槽骨吸收情况;实时定量RT-PCR检测Treg细胞相关因子IL-10、TGF-β1、Foxp3 mRNA和M2型巨噬细胞相关因子Arg-1 mRNA的表达水平。结果1、解剖显微镜下观察釉质牙骨质界(CEJ)到牙槽嵴顶(ABC)的距离,可见与正常对照组相比,通过测量颊、腭侧12个位点数值结果显示,单纯牙周炎组、Ig G组、anti-GITR m Ab组小鼠牙槽嵴顶高度均有降低,anti-GITR m Ab组小鼠比单纯牙周炎组、Ig G组小鼠牙槽嵴顶到釉牙骨质界的距离增大,骨吸收程度显著增加。2、苏木素-伊红染色结果显示:正常对照组中小鼠牙龈上皮结构完整,上皮下结缔组织内有少量的炎性细胞浸润,结合上皮附着位于釉牙骨质界处,牙周膜纤维排列整齐,牙槽骨形态结构完整,未见牙槽骨吸收;单纯牙周炎组、Ig G组结合上皮上方与牙面分离,结合上皮附着位于釉牙骨质界的根方,牙周膜胶原纤维溶排列紊乱,溶解,变性,固有层出现大量的炎细胞浸润,牙槽骨嵴顶吸收,可见破骨细胞和骨吸收陷窝形成;anti-GITR m Ab组结合上皮向根方迁移,牙周袋加深,结合上皮下方的胶原纤维变性、溶解,丧失,破骨细胞活跃,炎细胞浸润,牙槽嵴顶骨吸收明显,牙槽骨出现活跃的破骨性骨吸收陷窝。3、实时定量RT-PCR的方法检测结果显示:与正常对照组相比,单纯牙周炎组、Ig G组小鼠牙龈组织中Treg细胞IL-10、TGF-β1、Foxp3 mRNA表达增强,经方差分析,差异具有统计学意义(P<0.05),M2型巨噬细胞Arg-1 mRNA表达情况降低,但无统计学意义;与单纯牙周炎组、Ig G组比anti-GITR m Ab组牙龈龈组织中Treg细胞IL-10、TGF-β1 Foxp3mRNA表达降低(P<0.05),M2型巨噬细胞相关因子Arg-1 mRNA的表达减弱(P<0.05)。结论1、在牙周炎中M2型巨噬细胞介导的免疫应答减弱:与正常对照组相比,单纯牙周炎小鼠病损牙龈组织中,M2型巨噬细胞相关细胞因子Arg-1 mRNA表达水平降低。2、在牙周炎中Treg细胞能够上调M2型巨噬细胞介导免疫应答:采用anti-GITR m Ab阻断Treg细胞功能后,与单纯牙周炎组相比,anti-GITR m Ab组小鼠牙周组织破坏和骨吸收加重,M2型巨噬细胞相关因子Arg-1 mRNA的表达水平减弱。
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