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我们从医院胃镜检查阳性患者的胃粘膜标本片中分离到幽门螺杆菌,经微生物学检查,该菌株为弯曲状;脲酶试验、氧化酶试验、触酶试验均呈阳性;硝酸盐还原试验结果阴性.免疫检测试剂盒鉴定表明,其UreB、CagA、VacA抗体同时呈现阳性;分子生物学方法检查其脲酶基因,经BLAST进行核酸序列相似性比较,分离到的菌株其脲酶基因和GenBank上的相关序列同源性最高达到97﹪.以上实验表明分离到的菌株确为幽门螺杆菌.在此基础上,我们研究了幽门螺杆菌在固体培养基和液体培养基中的生长条件.实验结果显示:在固体培养时,幽门螺杆菌在哥伦比亚培养基(CAB)生长较好,而在液体培养时,以脑心浸汁培养基(BHI)为佳.固体培养中微量元素对幽门螺杆菌的生长作用不大,液体培养时淀粉和全血的添加有助于幽门螺杆菌的生长.幽门螺杆菌培养方法的建立,为相关抗原分子的克隆表达和动物实验打下了基础.最后,我们对重组UreB和融合蛋白ctube的免疫学活性以及CtxB的佐剂活性进行了评价.将BALB/c小鼠随机分为UreB组、UreB+CtxB组、ctube组和生理盐水组,分别一次性灌胃UreB溶液50μg、50μg UreB+10μg CtxB和ctube 50μg,生理盐水组则灌胃2ml生理盐水.一周后以同样的剂量和方式再次免疫小鼠,共免疫四次.最后一次免疫后6周,对小鼠予以H.pylori菌株隔周攻击2次.攻击完成4周后,处死小鼠,分析免疫结果.从脲酶活性分析和H.pylori 定植密度结果分析,UreB组、UreB+CtxB组和ctube组的被免疫小鼠都明显地获得了保护性免疫,免疫组小鼠的脲酶活性(OD550)和H.pylor定植密度低于对照组(P<0.01),具有显著差异.ELISA法分析被免疫小鼠血清中IgG和IgA 抗体浓度,说明上述抗原在小鼠体内可诱导以IgG和IgA升高为主要特征的保护性免疫应答,而且,UreB+CtxB组、ctube组的作用强于单纯UreB免疫组.RT-PCR法测定免疫完成后胃组织干扰素γ和白介素-4 mRNA合成的变化,结果显示口服UreB同时诱导Th1型、Th2型免疫应答,而ctube抗原在胃粘膜主要引起以Th2为主的应答过程.