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本实验以深入开发利用人参果,研发具有增强免疫力、促进微循环、抗衰老、抗糖尿病、提高记忆力的药物为目的,对人参果中的非皂苷类活性物质AF、AFG、L-焦谷氨酸的提取、分离、鉴定和定量等方面进行系统的研究。 首次从人参果中提取分离得到了AF、AFG。作者在前人基础上建立了新的分离体系。样品粉末用五倍量乙醇搅拌提取24小时,抽滤,弃去滤液,残渣加入10倍量双重蒸馏水,搅拌提取12小时,离心,取上清液,残渣继续加入双重蒸馏水,重复3次。合并三次提取后的离心上清液,减压浓缩至小体积,浓缩液过大孔树脂NKA柱层析,双重蒸馏水洗脱,收集水洗脱液冻干成粉末,置于冰箱中备用。3.0g冻干粉末溶于6 mL双重蒸馏水中,过Sephadex LH-20柱,双重蒸馏水洗脱(42mL/h),收集含AFG和AF的部分,溶于0.2%冰醋酸水溶液中,使成为200mg/mL溶液,过Bio-gel P-2柱,以0.2%醋酸水洗脱,洗脱流速为18mL/h,收集含AF和AFG部分,过硅胶低压干柱,以正丁醇:冰醋酸:水(2:1:1)洗脱,即得AF、AFG。 采用反复聚丙烯酰胺(Bio-gel)柱层析从合成物中分离精氨酸衍生物AF、AFG,作为从人参果中分离AF、AFG的标准品。通过反复实验证实,已纯化的标准品随贮藏时间的延长和贮藏温度的升高,含量逐渐降低。因此,标准品贮藏于-40℃、干燥的环境为最佳。在减压浓缩的过程中,也必须严格控制温度低于45℃,否则发生转化。 采用薄层扫描法测定人参花和人参果中AF含量。具体条件如下:以正丁醇:冰醋酸:水(2:1:1)为展开剂,以0.2%茚三酮乙醇溶液为显色剂,AF的测定波长λ_S=510nm,参比波长λ_R=685nm。结果表明AF在1.00-3.50μg范围内线性关系良好,相关系数R~2=0.999;平均回收率为99.77%(n=6),RSD=1.34%。此方法简便,可靠,可用于人参花和人参果中的AF的含量分析。 首次从人参果中发现了L-焦谷氨酸,并采用大孔吸附树脂层析,Sephadex LH-20柱层析,硅胶柱层析对该成分进行了提取分离。具体的提取分离条件如下:取人参果冻干粉末加10倍量蒸馏水超声提取3次,每次12h,合并提取液,离心(8000rpm30min),收集上清液浓缩至一定体积(1000mL),过大孔树脂NKA柱,用蒸馏水和20%乙醇洗脱,分别收集洗脱液。将水洗脱部分和20%乙醇洗脱部分分别上