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目的:研究多肽脯氨酰基顺反异构酶（Pin1）在氯化钴（CoCl2）致人脑神经胶质瘤细胞（H4细胞）损害中发挥的作用,并通过敲减Pin1或过表达Pin1基因功能实验手段及Pin1抑制剂预处理来进一步阐明Pin1在氯化钴致神经退行性损害中的作用和机制。方法:（1）以0、100、400、600μM CoCl2分别处理H4细胞24 h、36 h后,CCK8检测细胞增殖活力（n=8）;Hoechst-33258染色荧光显微镜和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况（n=3）;流式细胞术（FCM）检测细胞周期情况;qRT-PCR检测Pin1 mRNA的表达变化;Western-blot检测Pin1、Hif-1a、p-Tau蛋白表达水平。（2）通过敲减Pin1的慢病毒感染H4细胞后,筛选获得成功敲减Pin1基因的H4细胞。设置对照组、实验组（CoCl2浓度为400μM）,处理敲减Pin1 H4细胞24 h、36 h后,CCK8检测细胞增殖活力（n=6）;Hoechst-33258染色荧光显微镜和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况（n=3）;流式细胞术（FCM）检测细胞周期情况;qRT-PCR检测Pin1 mRNA的表达变化;Western-blot检测Pin1、Hif-1a、Cyclin D1、p-Tau、cis p-Tau、trans p-Tau蛋白表达水平。（3）通过过表达Pin1的慢病毒感染H4细胞后,筛选获得成功过表达Pin1基因的H4细胞。设置对照组、实验组（CoCl2浓度为400μM）,处理过表达Pin1 H4细胞24 h、36 h后,CCK8检测细胞增殖活力（n=6）;Hoechst-33258染色荧光显微镜和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况（n=3）;流式细胞术（FCM）检测细胞周期情况;qRT-PCR检测Pin1 mRNA的表达变化;Western-blot检测Pin1、Hif-1a、Cyclin D1、p-Tau、cis p-Tau、trans p-Tau蛋白表达水平。（4）通过抑制剂ATRA或Juglone与氯化钴共同应用处理H4细胞中。设置对照组、实验组（CoCl2浓度为200μM）,处理H4细胞72 h后,CCK8检测细胞增殖活力（n=6）;Hoechst-33258染色荧光显微镜和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况（n=3）;流式细胞术（FCM）检测细胞周期情况;qRT-PCR检测Pin1 mRNA的表达变化;Western-blot检测Pin1、Hif-1a、cis p-Tau、trans p-Tau蛋白表达水平。结果:（1）氯化钴明显抑制H4细胞的增殖、诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期;氯化钴可诱导Pin1基因mRNA和蛋白表达下调,Hif-1a蛋白和p-Tau蛋白表达上调,且具有剂量效应关系,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）与对照相比,Pin1基因敲减有效地促进氯化钴抑制H4细胞增殖,增强氯化钴诱导H4细胞凋亡,促进氯化钴阻滞H4细胞周期;Pin1基因敲减可加剧氯化钴引起H4细胞中的Pin1 mRNA表达降低。在氯化钴处理Pin1基因敲减的H4细胞中,与对照组相比,Pin1基因敲减可加剧Pin1蛋白表达下调、Hif-1a蛋白表达上调、Cyclin D1蛋白表达下调、p-Tau蛋白表达上调,cis p-Tau蛋白表达上调,trans p-Tau蛋白表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）与对照组相比,过表达Pin1有效地减缓CoCl2抑制H4细胞增殖,减弱氯化钴诱导H4细胞凋亡,减缓氯化钴阻滞H4细胞周期;过表达Pin1基因可减缓氯化钴引起H4细胞中的Pin1 mRNA表达降低。在氯化钴处理过表达Pin1基因H4细胞中,与对照组相比,过表达Pin1基因可减缓Pin1蛋白表达下调、Hif-1a蛋白表达上调、Cyclin D1蛋白表达下调、p-Tau蛋白表达下调,cis p-Tau蛋白表达下调,trans p-Tau蛋白表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）与对照组细胞相比,CoCl2组、ATRA+CoCl2组、Juglone+CoCl2组细胞增殖活力下降,细胞凋亡率增加,Pin1 mRNA表达下调;CoCl2组、ATRA组、ATRA+CoCl2组、Juglone组、Juglone+CoCl2组细胞Pin1蛋白表达下调、cis p-Tau蛋白表达上调、trans p-Tau蛋白表达下调,具有统计学意义（P<0.05）;与对照组细胞相比,CoCl2组、ATRA+CoCl2组、Juglone+CoCl2组细胞Hif-1a蛋白表达上调,具有统计学意义（P<0.05）。与CoCl2组细胞相比,ATRA+CoCl2组、Juglone+CoCl2组细胞增殖活力下降,细胞凋亡率增加、Pin1 mRNA表达下调、Pin1蛋白表达下调、Hif-1a蛋白表达下调、trans p-Tau蛋白表达下调;ATRA+CoCl2组细胞cis p-Tau蛋白表达上调,具有统计学意义（P<0.05）。与ATRA组相比,ATRA+CoCl2组细胞增殖活力下降、细胞凋亡率增加、Pin1 mRNA表达下调、Pin1蛋白表达下调、Hif-1a蛋白表达上调、cis p-Tau蛋白表达上调、trans p-Tau蛋白表达下调,具有统计学意义（P<0.05）。与Juglone组相比,Juglone+CoCl2组细胞增殖活力下降、细胞凋亡率增加、Pin1 mRNA表达下调、Pin1蛋白表达下调、Hif-1a蛋白表达上调、cis p-Tau蛋白表达上调、trans p-Tau蛋白表达下调,具有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）氯化钴可致神经细胞发生退行性损害作用,引起Pin1基因mRNA和蛋白表达下调。（2）敲减Pin1基因可促进氯化钴致神经细胞的退行性损害作用。（3）过表达Pin1基因可减缓氯化钴致神经细胞的退行性损害作用。（4）Pin1抑制剂ATRA或Juglone处理可促进氯化钴致神经细胞的退行性损害作用。（5）氯化钴可能通过缺氧引起Pin1基因功能下调,促进trans p-Tau蛋白转换成cis p-Tau蛋白而致神经细胞发生退行性损害作用。综上,Pin1在氯化钴致神经细胞发生退行性损害中起着保护作用,我们的研究为Pin1作为氯化钴致神经退行性损害重要防治靶点提供了重要的理论依据。