DPC4基因转染对结肠癌细胞生长的抑制作用及其作用机制

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目的:研究DPC4基因转染对结肠癌细胞生长的抑制作用及其作用机制。 方法:利用脂质体转染技术将PcDNA3.1-DPC4质粒和空载体PcDNA3.1质粒分别导入结肠癌细胞SW620;经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,采用Western blot和免疫组化S-P法检测细胞中DPC4的表达;把三组细胞分别接种到裸鼠皮下,观察其出瘤时间,并每三天测量一次肿瘤结节的最长径和最短径,30天后统一处死裸鼠,测量瘤重与瘤体积,观察各脏器有无转移;RT-PCR检测DPC4基因转染前后细胞内p21WAF1mRNA的表达;免疫组化S-P法检测三组裸鼠瘤纠织内p21WAF1蛋白的表达。 结果: 1、成功构建DPC4基因稳定高表达的结肠癌细胞株SW620。 2、成功构建结肠癌细胞SW620裸鼠移植瘤模型。 3、DPC4基因转染后导致出瘤时间延迟(P<0.05)。处死裸鼠分离瘤组织后,PcDNA3.1-DPC4-SW620组肿瘤的体积、重量均小于SW620组、PcDNA3.1-SW620组(P<0.05),抑瘤率为66%。 4、PcDNA3.1-DPC4-SW620细胞的p21WAF1mRNA含量高于SW620细胞、PcDNA3.1-SW620细胞(P<0.05)。 5、PcDNA3.1-DPC4-SW620组裸鼠瘤组织p21WAF1蛋白表达阳性强度高于SW620组、PcDNA3.1-SW620组(P<0.01)。 结论: 1、DPC4基因能够抑制结肠癌细胞SW620的裸鼠成瘤性。 2、DPC4基因通过诱导细胞周期负性调节因子p21WAF1的mRNA、蛋白质表达从而抑制细胞周期,实现抑制结肠癌细胞生长的功能。 3、DPC4基因具有抑制结肠癌细胞生长的作用,为结肠癌的侯选肿瘤抑制基因。
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