论文部分内容阅读
目的：建立U937泡沫细胞模型，研究SIRT1与泡沫细胞移出动脉粥样硬化斑块相关调控通路LXR-CCR7和促炎症信号NF-κB的相关性。 方法：体外培养人单核细胞株U937细胞，通过软脂酸钠和氧化型低密度脂蛋白构建泡沫细胞模型。实验分为空白对照组，转染试剂组，siRNA干扰组，高脂组、高脂+SRT1720组、高脂+SRT1720+干扰组。油红O对细胞进行脂肪染色，检测细胞内脂肪积累情况。以160nMPMA诱导 U937单核细胞，24h后细胞呈贴壁生长以后，进行 SIRT1 siRNA干扰操作，干扰48h后，进行 Western blot检验。然后在泡沫细胞模型中用 SIRT1激动剂 SRT1720使SIRT1高表达，高表达后再用 RNA干扰抑制SIRT1的表达，用Western blot法观察SIRT1、LXR及其下游靶分子CCR7和ABCA1的表达变化，以及炎症因子NF-κB和其下游靶分子TNF-α、IL-6的表达变化。 结果：观察细胞内脂肪积累的实验结果显示,高脂高胆固醇组诱导下的细胞内脂肪积累显著高于高糖对照组。Western blot实验结果表明siRNA对SIRT1蛋白表达有显著抑制作用，SIRT1蛋白表达显著下降。在泡沫细胞模型中，SRT1720使SIRT1蛋白表达水平升高，LXR和其靶分子CCR7蛋白水平无显著变化，而NF-κB以及其靶分子TNFα蛋白表达水平显著下降。在加入SRT1720的基础上再用RNA干扰抑制SIRT1的表达，结果表明RNA干扰使SIRT1的表达水平显著下降，LXR和其靶分子CCR7表达也随之下降；与此同时，NF-κB及其下游靶基因TNF-α表达水平显著升高。 结论：在高脂加氧化型低密度脂蛋白培养条件下,人单核细胞株内积累了大量的脂肪。我们的实验表明了在泡沫细胞中SIRT1是LXR-CCR7以及NF-κB信号通路的上游，并且有可能通过上调LXR-CCR7信号通路，抑制NF-κB炎症信号来参与调节泡沫细胞从动脉粥样硬化斑块中移出。为探究长寿基因SIRT1在动脉粥样硬化过程中调控机制提出了一个新的思路，为该病的防治提供了更理想的干预途径。