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结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是一种常见的消化道恶性肿瘤,也是一种由多种因素引起的恶性疾病。阿司匹林(Aspirin,ASA)作为经典解热镇痛抗炎药,主要应用于心脑血管疾病之中。有心血管疾病预防试验数据表明,常规服用阿司匹林能够降低约40%结肠癌的发病率,但其预防结肠癌发生的机制目前尚不清楚。T细胞免疫球蛋白域和免疫受体酪氨酸抑制基序蛋白(T cell immunoglobulin and ITAM domain,TIGIT)是近年来发现的协同共抑制分子,在诱导T细胞免疫耐受及肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用,CD155是TIGIT的受体,TIGIT-CD155信号通路介导细胞负性调控。本课题研究阿司匹林通过TIGIT-CD155信号通路调控肿瘤细胞和免疫细胞生物学特性对结直肠癌的作用机制进行探讨。第一部分阿司匹林通过TIGIT-CD155信号通路调控结肠癌细胞生物学功能的研究目的探讨TIGIT、CD155在结直肠癌组织和结肠癌细胞中的表达,并研究阿司匹林调控TIGIT-CD155信号通路对结肠癌细胞生物学功能的影响。方法收集来自宁夏医科大学总医院病理科的结直肠癌患者肿瘤组织和癌旁组织,并制成石蜡切片。采用免疫组织化学染色(Immunohistochemistry,IHC)检测TIGIT、CD226和CD155的表达。采用蛋白质免疫印迹实验(Western Blot,WB)检测不同结肠癌HT-29、SW480、SW620和HCT116细胞株TIGIT和CD155的表达。CCK8实验、划痕实验、Transwell实验和流式细胞术检测不同浓度阿司匹林(2 mMol/L、4 mMol/L、8 mMol/L)干预结肠癌HT-29细胞株0 h、24 h、48 h和72 h,观察阿司匹林对结肠癌细胞活性、迁移能力和细胞凋亡的影响。WB检测不同浓度阿司匹林干预结肠癌细胞48 h后,观察迁移相关蛋白MMP9和FAK的表达,凋亡相关蛋白BAX和Bcl2的表达,TIGIT-CD155信号通路中TIGIT和CD155蛋白的表达;以及阿司匹林浓度为8 mMol/L(IC50)下分别干预24 h、48 h和72 h后观察迁移相关蛋白MMP9和FAK,凋亡相关蛋白BAX和Bcl2,TIGIT-CD155信号通路中TIGIT和CD155蛋白的表达。酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测不同浓度阿司匹林干预结肠癌HT-29细胞后,培养细胞上清中TGF-β1和IL-10的表达。结果IHC结果显示:TIGIT和CD155在结直肠癌肿瘤组织中的表达显著高于癌旁组织,CD226未在肿瘤细胞上表达。WB检测结果显示:结肠癌细胞株HT-29、SW480、SW620和HCT116上均表达TIGIT和CD155。CCK8实验结果显示:在同一时间下,随着阿司匹林作用浓度的增加结肠癌细胞细胞活性显著降低;在同一浓度下,随着阿司匹林作用时间的延长结肠癌细胞细胞活性显著降低,阿司匹林的作用呈时间和剂量依赖性。划痕实验和Transwell实验结果显示:随着阿司匹林作用浓度和作用时间的延长,阿司匹林能够显著抑制结肠癌细胞的迁移能力。流式细胞术检测结果显示:随着阿司匹林浓度的增加结肠癌细胞凋亡率增高。WB检测结果显示:不同浓度的阿司匹林干预48 h后,肿瘤迁移相关蛋白MMP9和FAK的表达下调;抑凋亡蛋白Bcl2的表达下调,而促凋亡蛋白BAX表达上调;TIGIT-CD155信号通路中TIGIT的表达下调,CD155的表达没有显著改变。阿司匹林浓度为8mMol/L时,随着作用时间的延长肿瘤迁移蛋白MMP9和FAK的表达下调,促凋亡蛋白BAX的表达上调,抑制凋亡蛋白Bcl2蛋白下调;TIGIT-CD155通路中TIGIT的表达下调,CD155的表达没有显著改变。ELISA结果显示:在同一时间下,不同浓度阿司匹林处理结肠癌细胞后,细胞因子TGF-β1和IL-10的分泌量增加。结论TIGIT、CD155的表达与肿瘤的生物学功能相关,阿司匹林通过抑制TIGIT-CD155信号通路影响肿瘤细胞的增殖、凋亡和迁移,从而达到预防肿瘤的目的。第二部分阿司匹林通过TIGIT-CD155信号通路调控免疫细胞生物学功能的研究目的探讨TIGIT、CD155在免疫细胞上的表达,并研究阿司匹林调控TI G IT-CD 155信号通路对T淋巴细胞白血病细胞系(J u r k a t细胞)细胞生物学功能的影响。方法收集来自宁夏医科大学总医院病理科的CRC患者肿瘤组织和癌旁组织,并制成石蜡切片。采用IHC检测TIGIT、CD226和CD155在肿瘤浸润性淋巴细胞上的表达。CCK8实验和流式细胞术检测不同浓度ASA(1 m Mol/L、2m M o l/L、4 m Mol/L)对J u r k a t细胞细胞活性和细胞凋亡的影响。W B检测不同浓度ASA干预后凋亡相关蛋白BAX和Bcl2的表达,TIGIT-CD155通路中TIGIT和CD155的表达;阿司匹林浓度为4 m Mol/L(IC50)下分别干预24 h、48 h和72 h后观察凋亡相关蛋白BAX和Bcl2的表达,TIGIT-CD155通路中TIGIT和CD155的表达。ELISA检测不同浓度阿司匹林干预Jurkat细胞后,细胞上清中TGF-β1和IL-10的表达。结果IHC结果显示:TIGIT和CD226在CRC肿瘤组织浸润性淋巴细胞上表达显著高于对应癌旁组织中浸润性淋巴细胞上TIGIT和CD226的表达,CD155未在浸润性淋巴细胞上表达。CCK8实验结果显示:在同一时间下,随着阿司匹林作用浓度的增加Jurkat细胞的细胞活性呈下降趋势;在同一浓度下,随着作用时间的延长,阿司匹林能够显著抑制Jurkat细胞的细胞活性。流式细胞术结果显示:随着阿司匹林作用浓度和作用时间的增加,Jurkat细胞的凋亡率显著增加。WB结果显示:不同浓度的阿司匹林干预48 h后,促凋亡蛋白BAX的表达上调,抑制凋亡蛋白Bcl2的表达下调;TIGIT-CD155通路中TIGIT的表达下调;阿司匹林浓度为4m Mol/L时,随着作用时间的延长促凋亡蛋白BAX的表达上调,抑制凋亡蛋白Bcl2蛋白下调;TIGIT-CD155通路中TIGIT的表达下调。ELISA结果显示,在同一时间下,随着阿司匹林作用浓度的增加细胞因子TG F-β1和I L-1 0细胞因子分泌水平降低。结论TIGIT的表达与T细胞的生物学功能相关,阿司匹林通过影响TI G IT-CD 155信号通路影响J u r k a t细胞的增殖和凋亡,从而达到预防肿瘤的目的。