【摘 要】
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[目的]:脐带间充质干细胞(umbilical-cord derived mesenchymal stem cells,UC-MSCs)可以通过便捷无害的方法获得,在体外可长期传代培养,在再生治疗领域有广泛的应用前景。在
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[目的]:脐带间充质干细胞(umbilical-cord derived mesenchymal stem cells,UC-MSCs)可以通过便捷无害的方法获得,在体外可长期传代培养,在再生治疗领域有广泛的应用前景。在体内,干细胞生长在细胞外基质(extracelluarmatrix,ECM)中,而脱离了体内生长微环境后,干细胞受到体外各种不利因素的影响下容易发生过早衰老,极大地降低了干细胞的实际应用效果。脱细胞的细胞外基质(decelluarizedextracelluarmatrix,DECM)能够在体外模拟干细胞的体内生长微环境。人红系衍生的核因子-2(nuclear factor erythroi d-2-related factor 2,NRF-2)调控细胞内环境稳态和抗衰老相关基因表达。本课题旨在研究DECM是否能够通过NRF-2来防止过氧化氢(hydrogen peroxid,H2O2)造成的UC-MSCs早衰。[研究方法]:首先确定200 μM是适合诱导UC-MSCs早衰的H2O2亚致死浓度。分别使用普通组织培养聚苯乙烯(tissue culture polystyrene,TCPS)培养板和 DECM 培养 UC-MSCs,并使用H2O2诱导早衰。通过CCK-8检测细胞增殖活力变化,流式细胞仪测试细胞周期分布,β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞阳性比例,茜素红染色检验DECM对衰老UC-MSCs成骨能力的影响,RT-qPCR检验衰老及成骨相关基因表达水平,使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默NRF-2后确定其在DECM抗衰老中的作用。[结果]:与培养在TCPS上的UC-MSCs相比,培养在DECM上的UC-MSCs在H2O2诱导早衰的情况下表现出来更高的增殖活力,更低的G0/G1期细胞比例,更低的β-半乳糖苷酶阳性细胞比例,更强的成骨分化能力,下调的衰老相关基因表达水平以及更高的NRF-2表达水平。DECM培养UC-MSCs并用siRNA沉默NRF-2后,衰老相关基因表达水平和β-半乳糖苷酶阳性比例明显上调,证实了 NRF-2在DECM抗衰老中发挥关键的作用。[结论]:DECM在体外为UC-MSCs提供了适宜增殖和成骨分化的微环境,DECM能够通过NRF-2有效抗UC-MSCs衰老。
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