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前列腺癌是常见多发的严重威胁人类健康的疾病,在西方欧美国家中前列腺癌的发病率位居恶性肿瘤之首。在我国前列腺癌的发病率有逐年增加的趋势。到目前为止,对于前列腺癌仍然没有更好的治愈方法。在前列腺癌的发病早期多采用雄激素阻断疗法来治疗前列腺癌,有一定的治疗效果。但前列腺癌转变为雄激素非依赖前列腺癌之后,临床上目前还没有有效的治疗方法。前列腺癌从雄澂素依赖到雄激素非依赖的过程中雄性激素受体AR发挥了重要的作用。因此,对于前列腺癌研究一定要把注意力集中在AR上。AR在前列腺癌进展过程中发生了很多变化,但AR的作用一直是存在的。因此,研究AR信号通路是前列腺癌治疗得到突破的起点。寻找到更多AR下游所调控的基因,才能更好的了解前列腺癌的发生和发展,才能更好的寻找到治疗的突破点。EphA3属于受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases,RTK)家族中的Eph受体亚家族。EphA3是第一个人工克隆出来的Eph家族的分子。近年来的研究表明,EphA3在很多癌症中表达上调,也在一些癌症中发生了突变。在前列腺癌中对于EphA3的研究甚少,没有明确的结论。通过前期的探索,我们发现AR能够影响EphA3的表达,针对这个问题我们设计了以下实验:首先,我们检测了 WPMY-1、LNCaP和22Rv1细胞中的AR和EphA3,同时利用DHT刺激、过表达AR、抑制AR等手段处理LNCaP和22Rv1细胞,发现DHT刺激LNCaP细胞之后,EphA3的表达上调;在22Rv1细胞中过表达AR后,发现EphA3的表达也上调:在22Rv1细胞中利用siRNA抑制AR后,发现EphA3的表达呈现下调,所以我们认为AR能够影响EphA3的表达。随后,我们构建了 EphA3-Luc(-789)、EphA3-Luc(-317)、EphA3-Luc(-237)、EphA3-Luc(-789mSp1)等EphA3的启动子,利用荧光素酶报告基因实验来进行研究。结果发现EphA3-Luc(-789)和EphA3-Luc(-317)的活性随着AR的过表达而升高,随着AR的抑制而下降,说明AR能够调控EphA3启动子的表达;EphA3-Luc(-237)的活性没有随着AR的过表达而升高,也没有随着AR的抑制而下降,说明Sp1结合位点对EphA3启动子的表达起至关重要的作用;EphA3-Luc(-789 mSp1)的活性也没有随着AR的过表达而升高,没有随着AR的抑制而下降,说明AR发挥功能与Sp1结合位点有重要关系。因此认为AR是通过影响Sp1的结合位点进而影响EphA3启动子的表达。其次,在22Rv1细胞中,利用光神霉素(Mithramycin)抑制Sp1之后,发现Sp1自身的表达没有明显变化,EphA3的表达下调,同样利用siSp1抑制Sp1之后,EphA3的表达也下调。这个结果也进一步验证了荧光素酶报告基因实验的结果。最后,利用染色质免疫共沉淀实验和蛋白质免疫共沉淀实验发现,AR和Sp1在LNCaP和22Rv1细胞中形成复合物,AR和Sp1都能结合在EphA3的启动子上(-246～-243),所以我们认为AR与Sp1结合之后,Sp1再结合在EphA3启动子Sp1的结合位点上(-246～-243)。综上所述,本研究证实,AR和Sp1结合共同调控EphA3的表达。