【摘 要】
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仿刺参(Apostichopus japonicus)是一种重要的海洋经济作物,具有极高的营养价值,但是随着集约化养殖规模的扩大,仿刺参病害问题愈发严重。仿刺参免疫机理的研究,对提高仿刺参抗病能力和促进养殖业的健康发展具有重要意义。研究表明,核心岩藻糖基化在脊椎动物免疫反应中发挥重要的作用。但在棘皮动物中,关于核心岩藻糖基化的作用尚未见报道。本文以仿刺参作为研究对象,探讨核心岩藻糖基化在仿刺参免疫
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仿刺参(Apostichopus japonicus)是一种重要的海洋经济作物,具有极高的营养价值,但是随着集约化养殖规模的扩大,仿刺参病害问题愈发严重。仿刺参免疫机理的研究,对提高仿刺参抗病能力和促进养殖业的健康发展具有重要意义。研究表明,核心岩藻糖基化在脊椎动物免疫反应中发挥重要的作用。但在棘皮动物中,关于核心岩藻糖基化的作用尚未见报道。本文以仿刺参作为研究对象,探讨核心岩藻糖基化在仿刺参免疫反应中发挥的作用。应用扁豆凝集素(LCA),通过免疫荧光和流式细胞术对仿刺参体腔细胞核心岩藻糖的表达进行定性和定量的分析,发现阳性细胞达到80%以上。在变形细胞、桑椹胚细胞、小球细胞和淋巴细胞表面检测到了阳性信号,且大部分变形细胞为阳性细胞。同时,通过凝集素印迹分析,发现体腔细胞及体腔液中均存在不同分子量的核心岩藻糖基化蛋白。通过LCA阻断实验,分析核心岩藻糖基化在仿刺参抗感染免疫中发挥的作用。发现LCA阻断能够显著降低体腔细胞的吞噬能力,具体表现为:LCA阻断组体腔细胞对荧光微球和灭活灿烂弧菌的吞噬能力显著下降;在LPS刺激条件下,LCA阻断组对荧光微球的吞噬能力仍显著下降。同时,LCA阻断还能够显著降低仿刺参细菌清除能力及体腔细胞黏附能力。提示核心岩藻糖基化有利于体腔细胞更好地发挥吞噬、黏附和细菌清除的免疫功能。此外,LCA阻断后,体腔细胞的细胞毒活性明显升高,提示体腔细胞中具有细胞毒活性的嗜酸性球形细胞可能通过核心岩藻糖基化对其细胞毒活性发挥一定的抑制作用,从而调节细胞毒作用的生理平衡。应用LCA联琼脂糖凝胶珠和磁珠分别对核心岩藻糖基化蛋白和细胞进行分离纯化和分选。通过亲和层析分别得到体腔细胞和体腔液的核心岩藻糖基化蛋白,进一步的液质分析分别鉴定出多种蛋白种类。通过磁珠分选,得到核心岩藻糖基化细胞,为仿刺参核心岩藻糖基化功能的进一步深入研究提供了实验依据。综上所述,核心岩藻糖基化蛋白表达于体腔细胞表面及体腔液中,能够通过提高体腔细胞的吞噬和黏附能力、增强细菌清除能力、抑制细胞毒活性而发挥免疫调节作用。核心岩藻糖基化蛋白的纯化和种类鉴定以及核心岩藻糖基化细胞磁珠分选方法的建立,有利于进一步探索核心岩藻糖基化在仿刺参免疫反应中的重要作用。
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