慢性髓细胞白血病异基因外周血联合骨髓造血干细胞移植后NK细胞表型及功能重建的研究

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目的观察慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)患者进行异基因外周血联合骨髓造血干细胞移植(allo-PBSCT+BMT)后免疫重建中NK细胞表型及其受体谱重建的规律和NK细胞功能的重建情况。方法选择11例采用HLA6/6位点相合同胞allo-PBSCT+BMT的CML患者,其中慢性期6例,加速期1例,急变期4例;男性9例,女性2例;中位年龄35岁(18~45岁)。使用流式细胞术检测移植受者植入时、移植后30天、60天、90天、120天、180天、270天、360天的T细胞、NK细胞表型及其受体谱的变化和重建规律。同时取10名健康志愿者进行T细胞、NK细胞及其受体谱的检测作为对照。植入时和移植后30天采集移植受者外周血分离单个核细胞使用51Cr以K562细胞为靶细胞进行体外杀伤实验,正常志愿者外周血分离的单个核细胞作为实验对照。结果1,造血重建时NK细胞即开始重建,移植后30天(+30天)NK细胞绝对值达到高峰,约占淋巴细胞的(37.1±7.06)%,较正常水平明显升高,+60天后比例恢复正常。2,NK细胞受体:活化性受体NKP46在+30天时比例高达(92.1±33.65) % ,一年内逐渐下降。另一活化性受体NKG2D植入时为(36.7±14.33)%,+60天迅速上升至正常水平,以后一直稳定在正常水平;抑制性受体NKG2A在植入时占NK细胞的(90.3±15.35)%,远远高于正常水平,但+60天迅速下降到(45.8±12.36)%,以后比例较稳定;抑制性受体CD158a在移植后一年内始终低于正常水平, CD158b植入时在正常水平,+60天CD158b逐渐上升达到NK细胞的(58.5±6.58)%,高于正常水平并基本稳定。CD94在移植后一年始终占NK细胞90%以上,与正常水平类似;各种NK受体谱在移植后120天基本达到稳定状态。3,NK细胞杀伤功能在植入时达到正常水平,+30天时杀伤功能高于正常对照(P<0.05)。结论Allo-PBSCT+BMT与其他移植方式相比,移植后NK细胞比例虽略低,但以成熟表型为主,并且NK细胞的杀伤功能在植入时即达到正常人水平,移植后30天杀伤功能增强,杀伤率明显大于正常对照。同时11例移植受者中位随访18(13~27)月,急性GVHD发生率9%,复发率为零、预计二年无事件生存率90.9%。我们认为allo-PBSCT+BMT疗效优于allo-PBSCT或allo-BMT,除免疫重建迅速外推测NK细胞在其中发挥了重要的移植物抗白血病效应(GVL)及诱导免疫耐受作用。
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