【摘 要】
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植原体(Phytoplasma)是一种没有细胞壁的原核细胞,只存在于植物韧皮部位和一些半翅目昆虫相关的唾液腺细胞中。寄主范围广,危害症状多样,严重威胁农林业生产及经济的发展。作为山东省主栽果树之一的甜樱桃,对山东经济发展起着重要作用。为研究甜樱桃花变绿植原体致病机理,本研究初步利用分子生物学技术对甜樱桃花变绿植原体进行鉴定和分类,对全基因组进行测序及其效应因子的原核表达进行研究。首先,利用分子生物
【基金项目】
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“南疆部分特色果树植原体株系与柳树花变叶植原体的关系研究”(项目编号:31060238)课题主持人:朱天生 教授(塔里木大学); 国家自然科学基金项目“枣疯植原体效应因子JWB406与SPL11互作调控丛枝症状形成的分子机制研究”(项目编号:32072402)课题主持人:高瑞 副研究员(山东省农业科学院); 兵团特色果树生产工程实
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植原体(Phytoplasma)是一种没有细胞壁的原核细胞,只存在于植物韧皮部位和一些半翅目昆虫相关的唾液腺细胞中。寄主范围广,危害症状多样,严重威胁农林业生产及经济的发展。作为山东省主栽果树之一的甜樱桃,对山东经济发展起着重要作用。为研究甜樱桃花变绿植原体致病机理,本研究初步利用分子生物学技术对甜樱桃花变绿植原体进行鉴定和分类,对全基因组进行测序及其效应因子的原核表达进行研究。首先,利用分子生物学技术对樱桃带化病和甜樱桃花变绿的病原进行鉴定,明确该病的病原为植原体。并对樱桃带化和甜樱桃花变绿植原体进行基于16S rRNA基因构建系统进化树,系统进化树分析表明樱桃带化和甜樱桃花变绿植原体均属于16Sr V-B亚组。其次,通过PCR技术对甜樱桃花变绿植原体的rp基因和tuf基因进行扩增,经克隆测序、Blast对比和系统进化树分析。甜樱桃花变绿植原体属于rp V-C和16Sr V-B亚组。为进一步研究甜樱桃花变绿植原体基因组成分、功能以及与其他植原体的进化关系,首先利用第一代、第二代、第三代测序技术进行全基因组测序,明确了甜樱桃植原体基因组的大小、长度、G+C含量及基因组组分等。甜樱桃花变绿植原体基因组大小为775344bp,基因总长度为599460bp,G+C含量为24.7%,含有774个基因;tRNA有32个,5s rRNA、16s rRNA和23s rRNA均有2个,共有38个非编码RNA;有5条前噬菌体序列。随后将甜樱桃花变绿植原体测序得到的774个基因注释到不同类型的数据库,进行分类和功能预测。预测结果表明有11个细菌致病菌毒力因子;2个糖苷水解酶;注释到不同的3个功能数据库得到约有380个左右的功能基因;有151个Ⅲ型分泌系统效应蛋白。最后通过基因组比较学分析发现甜樱桃花变绿植原体基因组与16Sr V组的‘Ca.P.ziziphi’的亲缘关系最近,由同一个祖先进化而来;与16Sr XII组的Strawberry lethal yellows phytoplasma str.NZSb11基因组关系最远。通过甜樱桃花变绿植原体全基因组测序、基因功能分析及比较基因组分析明确基因组具体组分、基因功能和物种进化程度,为后续致病机理研究以及功能基因研究奠定理论基础。为进一步研究该病害的发生机理、传播规律,本研究已通过原核表达将甜樱桃花变绿植原体的SCh V-TA406和SCh V-TA157两个效应因子在宿主Rossetta(DE3)内进行诱导表达,随后进行SDS-PAGE电泳检测,证实纯化得到特异性目的条带,即为重组的SCh V-TA406和SCh V-TA157蛋白,为大量表达,为后续该类病害的防治奠定了基础。
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