目的:Tet-on系统的优势在于其调控的严谨、可控、背景表达低,因此使其成为最具潜力的基因调控系统,鉴于Tet-on系统这些优点,我们构建Dox诱导调控BMP-2表达的单质粒Tet-on表达系统,并且转染大鼠脂肪来源的间充质干细胞,研究不同浓度的诱导剂Dox诱导大鼠BMP2表达对ADSCs成骨分化的影响。方法:应用PCR技术扩增大鼠BMP2基因序列并插入到单质粒Tet-on载体中,构建单质粒pTet-BMP2重组质粒,与pMD2.G及psPAX2一起共转染293T,在48h与72h两个时间点收集病毒液上清与浓缩病毒;从大鼠腹股沟与大网膜提取大鼠脂肪肝细胞,并且对ADSCs进行传代培养、流式与干性的鉴定;观察不同浓度的诱导剂Dox对ADSCs增值与凋亡的影响;将浓缩病毒转染ADSCs,并使用不同浓度诱导剂Dox对ADSCs进行表达调控;应用Western Blot技术检测BMP-2表达量与诱导剂Dox不同浓度之间的关系;茜素红染色研究成骨分化钙结节数量与诱导剂Dox的诱导剂量之间的关系;qPCR方法摸索成骨分化标志基因(ALP、OCN、COL I)的表达水平情况与Dox的诱导剂量和诱导时间的关系。结果:成功构建pTet-BMP2重组质粒和严格调控BMP2表达的Tet-on慢病毒载体并且转染脂肪干细胞;BMP2蛋白的表达量与诱导剂Dox之间存在严格的剂量依赖性关系,Dox终浓度在0-5ug/ml时,ADSCs细胞内BMP2表达量随Dox浓度增加而增多,在诱导剂Dox剂量为5ug/ml时BMP2蛋白的表达量最高;茜素红钙盐染色实验显示,添加诱导剂Dox组较未添加Dox组染色具有明显差异,且随着Dox浓度的增加,染色区域越明显;qPCR结果显示添加诱导剂Dox骨分化早期标志基因和其他相关基因mRNA的表达水平均上调,且与诱导剂Dox之间存在剂量依赖性关系。结论:本研究成功构建了严格调控BMP2表达的单质粒Tet-on调控系统的ADSCs细胞株,且ADSCs成骨分化的生物学行为与单质粒Tet-on调控系统BMP2表达之间存在严格的剂量依赖性关系。