精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)是指位于雄性哺乳动物睾丸的曲细精管生精上皮基膜内侧的一群具有高度自我更新能力和分化潜能的细胞,在哺乳动物中一般是指未分化的A型精原细胞。对其在体外培养一直是研究精子发生机理和对精原干细胞研究利用的基础,本研究探究如何更好地在体外条件下培养和对其初步应用。本研究包括三部分内容：第一部分是关于小鼠精原干细胞分离纯化和鉴定的研究；第二部分是关于红景天多糖对精原干细胞体外增殖的作用；第三部分是关于利用精原细胞进行移植的探究,获得如下结果：1.对小鼠睾丸的生殖细胞及精原细胞进行体外分离、纯化和初步鉴定。对出生后6-8日龄的昆白小鼠睾丸实质组织,采用Ⅳ型胶原酶、DNaseⅠ和胰蛋白酶组合消化法分离精原细胞,制备单细胞悬液,用多次的差速贴壁法纯化精原细胞；对纯化后的细胞培养,随后进行碱性磷酸酶(AP)染色鉴定和RT-PCR鉴定,初步确定精原干细胞。2在精原细胞的体外培养体系中加入红景天多糖,探究其对精原细胞增殖的影响。在精原细胞与Sertoli细胞共培养的体系和Sertoli细胞单独培养体系中加入红景天多糖,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测红景天多糖对各自增殖的影响。结果发现,与对照组相比,在共培养体系中,添加红景天多糖能显著促进精原细胞的体外增殖,且最适添加浓度为300ng/mL;而红景天多糖对Sertoli细胞的体外增殖影响不显著。3.探索通过对兔的睾丸输出管注射携带有外源基因的精原细胞来实现移植。对3月龄左右的獭兔睾丸实质组织,采用前述方法获得精原细胞。选用人巨细胞病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白(pCMV-EGFP)表达载体构建的腺病毒,体外转染精原细胞。然后通过睾丸输出管,将供体细胞和外源基因孵育液一同注射到兔睾丸内。注射后一周左右,取出受体睾丸,制作组织冰冻切片,观察绿色荧光情况；同时提取组织蛋白,通过Western-blot进行相关分析。结果表明,荧光显微镜下观察受体睾丸的冰冻切片,发现有绿色荧光；而Western-blot结果发现受体动物的睾丸内有目的蛋白的表达。以上结果说明本试验通过睾丸输出管注射初步将精原细胞移植入方法的可行性。