石油开采、加工、运输过程中往往会造成石油污染,如石油泄露会造成严重的环境污染,微生物修复是解决石油污染的最有效的途径之一,因此研究产表面活性剂的原油油降解细菌对原油污染环境的治理具有重要的研究价值和应用前景。本研究从青藏高原土样中富集到能够在2%原油浓度下产表面活性剂细菌菌株34株,对其菌落形态进行了观察,并分析了其16S rRNA基因序列。采用重量法测定34株菌株的原油降解率,比色法检测了菌株产表面活性剂的乳化性能,超声波法测定了菌株产表面活性剂的乳化稳定性,薄层层析法分析了菌株产表面活性剂的类型,并对部分菌株的原油降解特性及其影响因素进行了研究,主要结果如下。1.获得了34株产表面活性剂的原有降解细菌菌株,16S rRNA基因序列分析表明这些细菌归属于不动杆菌属（Acinetobacter）、芽孢杆菌属（Bacillus）、假单胞菌属（Pseudomonas）、节杆菌属（Arthrobacter）、红球菌属（Rhodococcus）等。2.34株细菌可产生以糖脂和磷脂混合物为主要类型表面活性剂,其乳状液为O/W型,具有较好的乳化稳定性,促进原油增溶,对原油中烃类的降解具有促进作用。在2%原油为唯一碳源的培养基上,20℃、180 rpm培养7 d后,34株菌株中原油降解率超过50%的菌株有14株。降解率较高的菌株为Acinetobacter、Pseudomonas和Lysinibacillus等属细菌。其中L.fusiformis 23-1对原油的总降解率为57%,GC-MS分析表明其对原油中烃类的降解率不同,对C₁₂-C₂₈的直链饱和烷烃降解率达到99%以上,对C₁₁-C₂₃的支链烷烃的降解率为85%左右,对短链烷烃(C₁₂以下)和长链烷烃(C₂₈以上)以及芳香烃的降解能力较弱。菌株D.maris Y35可较好降解C₁₄、C₁₆烷烃和环己烷,对其他碳数的烷烃及芳香烃降解能力较弱。研究了菌株L.fusiformis 23-1、L.fusiformis 11-4、A.calcoaceticus YF11-2、A.calcoaceticus SY03134原油降解的影响因素,结果表明最适宜的降解条件为初始pH 7.5、温度为25℃,培养时间8 d,偏碱性的条件有利于菌株对原油的降解。3.PCR法检测了34株菌株中原油降解相关的7个功能基因,发现大部分菌株基因组中具有烷烃羟化酶基因alkB、黄素单加氧酶基因almA、萘双加氧酶基因ndoB、邻苯二酚2,3-双加氧酶基因xyLE,部分菌株基因组中还具有细胞色素P450基因、邻苯二酚1,2-双加氧酶基因C12O和邻苯二酚2,3-双加氧酶基因C23O。4.Q-PCR法测定了不同碳链的烃类对菌株L.fusiformis 23-1和D.maris Y35功能基因alkB、almA和ndoB表达的影响,结果表明,加入C₁₈-C₃₆烷烃5 h后L.fusiformis 23-1alkB的表达水平最大上调52倍,加入C₈-C₂₀烷烃5 h后almA的表达水平最大上调15倍,加入在C₁₄-C₃₆烷烃5 h后ndoB表达水平最大下调6倍。加入C₈-C₂₀烷烃5 h后D.maris Y35 alkB的表达水平最大上调10倍,加入C₁₀-C₁₄烷烃5 h后ndoB的表达水平最大上调1倍,除C₁₆外,其余不同碳链烃类对almA表达水平影响不显著。这些结果表明,不同细菌菌株以不同的机制应对环境中的烃类化合物。