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目的:多发性硬化(Multiple sclerosis ,MS)是中枢神经系统常见的脱髓鞘疾病之一,其临床特征表现为复发-缓解交替,并进行性加重,但其发病机制尚不十分清楚,因而,目前还没有找到十分有效的治疗方法。病理学研究证实,多发性硬化初期就存在髓鞘损伤,但随着时间的推移髓鞘反复损伤而修复不完全,使得轴索得不到保护,继发性损伤,导致临床症状进行性加重。因此,保护髓鞘、促进髓鞘再生是治疗多发性硬化的有效方法。α-硫辛酸作为一种抗氧化剂、免疫调节剂,可以减轻中枢神经系统的氧化和免疫损伤,进而可能对髓鞘具有一定的保护和促进再生作用。髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)是髓鞘的重要组成部分,对髓鞘膜状板层结构的维持有重要作用。当髓鞘结构被破坏时,MBP从髓鞘上游离,造成髓鞘板层松散或脱失。因此,检测脑脊液中MBP的含量变化,可以间接了解中枢神经系统脱髓鞘程度。由于大鼠的脑脊液含量少且不易获取,我们采取直接检测EAE大鼠的腰膨大组织MBP蛋白的含量变化,来直接了解长病程中髓鞘的损伤程度及α-硫辛酸是否对髓鞘损伤有保护作用,并通过检测免疫细胞及细胞因子来探讨多发性硬化的发病机制和α-硫辛酸的保护机制。方法:实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis , EAE)是研究多发性硬化的理想动物模型。本实验用小剂量豚鼠脊髓匀浆为抗原免疫雌性Wistar大鼠建立EAE模型,发病后当天开始给予α-硫辛酸(α-lipoic acid ,LA)腹腔注射(100mg/kg/d,共7d),并进行长达180天的观察和研究。运用神经功能评分、HE染色、三色染色、电镜、Western Blot等多种方法定性和定量观察大鼠中枢神经系统髓鞘脱失情况来反映LA的治疗效果。同时,运用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的水平,流式细胞术检测调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)即CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞的表达,以对免疫机制进行初步探讨。结果:1自然病程组和LA干预组大鼠的180d的平均每天积累神经功能评分相比P< 0.01有显著差异(图2)。佐剂组无发病。因发病后才给予药物干预,故两组大鼠潜伏期没有明显差别,但复发率相比χ2=10.797, P=0.001.P<0.01有显著差异(表1)。说明LA有减轻EAE病情、减少复发的作用。2自然病程组与LA干预组发病后7d时HE染色可见炎细胞浸润和血管袖套现象(图4)。3三色染色(图5)和电镜观察(图7)均可见EAE大鼠髓鞘板层松散,电镜观察发病后180d自然病程组髓鞘崩解,有碎片堆积(图8A);LA干预组髓鞘板层损伤较轻,可见再生的薄层髓鞘(图8B)。佐剂组髓鞘板层致密(图6)。4 Western Blot显示(表2,图9,图10)发病后7d时三组MBP蛋白表达量无明显差别;与同期佐剂对照组比较自然病程组发病后180d时MBP表达下降,t=6.800,P=0.002,P<0.01,有明显差异;硫辛酸干预组发病后180d时MBP表达与同期佐剂对照组比较也下降t=3.389,P=0.028,P<0.05,有统计学差异。自然病程组发病后180d时与硫辛酸干预组同期相比MBP表达更低,t=4.035,P=0.016,P<0.05有统计学差异。说明LA对髓鞘有远期的保护作用。5 ELISA检测结果显示(表3、4、5,图11、12、13):无论自然病程组还是LA治疗组的大鼠血清中TNF-α的表达量在发病后7d和14d都高于佐剂对照组,P<0.01,有显著差异;LA治疗组7d和14d与同期自然病程组比较均下调,发病后7d(P<0.01)、发病后14d(P<0.05),说明LA对TNF-α有下调作用。TGF-β的表达量无论自然病程组还是LA治疗组的发病后7d和14d都低于佐剂对照组,分别为P<0.01和P<0.05;LA治疗组7d和14d与同期自然病程组比都上调,发病后7d(P<0.01)、发病后14d(P<0.05),说明LA对TGF-β有上调作用。流式细胞术检测全血中CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞的数量与TGF-β水平的变化趋势一致。自然病程组和LA治疗组大鼠于发病后14d较发病后7d时TNF-α有不同程度的降低,TGF-β和CD4~+CD25~+Foxp3~+T有不同程度的上升。说明三因子与疾病的严重程度有关。发病后180d时三组无差别。结论:本实验通过长达180d的观察研究发现,在发病起始给予LA治疗可以减轻EAE病情,减少复发,抑制促炎因子,上调抑炎因子,从远期效果来看,LA可以减少MS患者髓鞘的脱失,促进髓鞘再生。提示LA可以作为治疗MS的一种有效药物。