随着社会的发展和科学的进步，诸多疾病已经能够治愈。恶性肿瘤已经成为人类致死的头号杀手，肿瘤治疗被认为是当前医学和生物学研究的难题之一。肿瘤患者的发病率和死亡率逐年增加，肿瘤治疗传统方法的发展已经举步维艰。寻找更加有效安全的治疗理念和方法成为当前医学和生物学相关专业领域的首要任务。本研究通过同源重组方式构建携带p14ARF基因的重组腺病毒Ad-pShuttle-CMV-p14ARF (PCA)。植物凝集素是一类能特异性凝集细胞的非酶糖蛋白，由于其能特异性结合单糖或者糖复合物，植物凝集素在免疫反应、植物防御、信号传导及诱导细胞凋亡中具有重要作用。甘露糖结合凝集素是目前研究最深入的凝集素。雪花莲凝集素是第一个被研究的凝集素，现在单子叶甘露糖结合凝集素已经被归类为雪花莲相关凝集素，它们广泛存在于高等植株上，能识别聚糖复合物。三叶半夏属于天南星科半夏，是一种传统的中草药，具有两千多年的药用历史。半夏凝集素(Pinellia ternata agglutinin, PTA)属于单子叶甘露糖结合植物凝集素，主要储存于半夏块茎中，是半夏蛋白的主要药用活性成分。PTA能特异性识别并结合甘露聚糖，而不与单体甘露糖，葡萄糖和麦芽糖结合。PTA特异性的凝集小鼠血细胞而不凝集人血细胞。大量的研究已经表明半夏凝集素对肿瘤细胞，真菌及病毒等具有良好抑制增生作用，本研究通过同源重组方式构建携带p14ARF基因的重组腺病毒Ad-pShuttle-CMV-p14ARF (PCA)，并分别研究PCA、PTA单独及联合使用对结肠癌细胞株SW480及HT-29细胞增殖的抑制作用。方法：本研究利用Adeasy系统成功构建携带p14ARF基因的复制缺陷型腺病毒，命名为Ad-pShuttle-CMV-p14ARF (PCA)；PCR方法鉴定阳性重组子病毒；通过在293A细胞中扩增，利用氯化铯(CsCl)密度梯度离心、纯化得到高滴度的病毒；运用TCID50法在293A中测出目的病毒PCA的滴度。利用亲和层析法分离纯化半夏凝集素并测定浓度。通过MTT法分别检测PCA、PTA单独及联合使用对细胞增殖的影响；采用结晶紫染色法分别定性分析PCA、PTA单独及联合使用对两种结肠癌细胞的杀伤作用；Hoechst33258荧光染色法检测经PCA、PTA单独及联合使用后，细胞发生凋亡的形态学变化。结果：MTT法检测结果显示PCA、PTA及联合使用均能抑制结肠癌细胞SW480及HT-29增殖，随着药物剂量增大、作用时间延长，细胞存活率下降，且联合使用效果显著高于二者分别单独使用；结晶紫染色法观察到不同浓度的PCA、PTA单独及联合使用对结肠癌细胞SW480和HT-29杀伤作用，杀伤效果随药物浓度升高而愈发明显。Hoechst33258荧光染色可观察到PCA组、PTA组及联合使用组均出现典型的凋亡小体，联合组比单药组细胞凋亡更明显。结论：本研究首次将腺病毒与天然半夏凝集素进行联合使用，探究二者是否具有协同作用。实验结果表明：复制缺陷型重组腺病毒PCA与半夏凝集素PTA均能抑制结肠癌细胞株增殖，联合使用效果大于二者分别单独使用。