目前认为癌基因的激活和抑癌基因的失活是肿瘤发病的分子机制之一，迄今为止，已发现100余种癌基因，但是抑癌基因为数较少，大多数抑癌基因（如Rb、p53、p16等）都是参与细胞周期的调控、维持细胞遗传稳定性和细胞正常增殖的重要基因，而且许多癌基因如cyclinD1、BcL2、c-myc、MDM2等以及病毒蛋白Sv40大T抗原等都是通过结合抑癌基因并进而干扰细胞周期的正常进展。进一步显示抑癌基因在肿瘤的发病机制中占有更为重要的地位。已有报道与胶质瘤发生发展相关的抑癌基因有Rb、p53、p16、PTEN等。在与胶质瘤相关的抑癌基因中，p16基因则有相当高的突变率，平均为85％，且以纯合缺失为主。体内、体外研究证实恢复p16基因缺失的肿瘤细胞的p16基因表达有明显的抑瘤作用，提示p16基因替代疗法有着潜在的应用前景。但对于p16基因转染后是通过何种机制抑制肿瘤细胞生长的尚未完全明了。目前认为肿瘤的发生是多基因的累积异常而致，对于转染p16基因有明显抑制生长效应的肿瘤细胞，是否还有其它抑癌基因表达异常？转染p16基因后，其它的抑癌基因表达是否会发生变化？阐明这些问题无论对p16基因替代治疗还是对肿瘤发病机制的研究都有着重要的意义。 胶质瘤多数是从一个分化成熟的细胞突变成未分化细胞，这种“返祖”现象发生的根本原因是癌基因激活和/或抑癌基因失活。目前实验已经证实癌细胞在诱导分化剂如RA、HMBA和SB等作用下可向正常细胞转化，其机制之一是调节癌基因和/或抑癌基因的表达而实现的。那么，在恢复肿瘤细胞缺失的抑癌基因的基础上，再辅以诱导分化剂是否可以得到更好的效果呢？地塞米松（Dex）是临床治疗胶质瘤的常用药物，它可以明显减轻瘤周水肿，近期报道对人成神经细胞瘤有 人胶质笆幻臼转染一6基因后主物学特性的观察 中文摘要 生长抑制和诱导分化作用，它是否对胶质瘤细胞也有促分化作用尚无 相关报道。 抑癌基因替代疗法在实验研究上取得了明显效果，但放疗和化疗 作为肿瘤辅助治疗也有着不可替代的作用。目前对… 基因有放射增 敏作用看法一致，而对胶质瘤细胞转染P16基因后与化疗药物敏感性 的关系尚无定论。 本研究将口 基因转染巾 功能缺失的人胶质瘤细胞系SHG个4， 探讨：＊）外源性… 基因对P16功能缺失的胶质瘤细胞增殖的影响。 Q）胶质瘤细胞转染P16基因后相关癌基因和抑癌基因表达变化。 Q）Dex对胶质瘤细胞有无诱导分化作用，恢复pl6基因功能，对诱导 分化剂的作用有无影响。Q）胶质瘤细胞转染口 基因后对常用化疗 药物敏感性的变化。 第一部分人厕瘤细胞转染P16基因后细胞增殖 及相踢因甜变化 为探讨外源性pl6基因对pl6基因缺失的胶质瘤细胞增殖的影响 及转染pl6基因后相关癌基因、抑癌基因表达的变化。用RT干CR和 免疫组化法证实人胶质瘤细胞系SHGA4有… 基因功能缺失。应用 分子克隆技术将人p16 CDNA克隆入哺乳动物基因表达载体pCDNA3的 Ballltll和 Xh。互位点之间，构建 p16基因表达载体 pCDNA3－pl6。月质 体介导法将其转染到 SHG叶4。经 G4筛选得到表达 PI6蛋白的阳性 克隆SHG－44－pl6细胞。阳性克隆经 PCR证实p16 CDNA己转入SHG－44 细胞，Western blot和免疫组化显示有 pl6蛋白表达。细胞生长曲 线显示SHG44下 16生长明显受到抑制，其抑制率达84．27％在软琼 脂上克隆形成能力下降约6倍。细胞周期分析表明处在Gl期细胞由 35．53％提高到61．35％。SHG－44－P16在裸鼠体内致瘤能力有所下降。 RT－PCR半定量分析SHG－44细胞转染P16 基因前后的皿、CDK4、P53 和PTEN基因表达量的变化，SHG叶4细胞转染P 16基因后CDK4表达量 下降，而p53表达量升高，Rb、PTEN表达无明显变化。野生型p16基 因转入P16基因功能缺失的肿瘤细胞，能恢复其抑制肿瘤细胞生长的 11 V 人胶质旧细胞转染p16某冈厄生物学特性的观紊 中文摘要 功能。这种抑制功能可能是通过P16蛋白下调CDK4表达、上调P53 表达而实现的。P53可能与P16起着协同作用。P16基因替代疗法在 胶质瘤治疗上有着潜在的应用前景。 第H部分人胶质瘤细胞转染P16基因 对诱导分化作用影响 为研究恢复扯 抑癌基因表达后，再加以诱导分化剂能否得到更 好的分化效果和 Dex对?