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本文以油菜蜂花粉为研究对象,对花粉的破壁方法及其中黄酮类物质的提取和纯化工艺进行了基础研究。初步探明并比较了几种花粉破壁方法和黄酮类物质的提取工艺,为蜂花粉在食品、药品等领域的开发和利用提供了相应的工艺参数和科学依据。
首先,进行了花粉破壁技术的研究。以花粉的破壁率为指标,分别采用微波破壁法、温差-超声波复合破壁法和发酵破壁法,对花粉进行破壁处理,系统研究了各种方法中的不同因素对花粉破壁率的影响。实验采用单因素实验及正交实验设计对花粉的破壁工艺进行了优化。结果表明,微波破壁法的最佳工艺条件为:解冻时间8min、处理次数4次、解冻温度60℃、微波功率540W;温差-超声复合破壁法的最佳工艺条件为:温差为100℃、水浴时间7h、料液比1:10、冷冻时间24h,在功率为200W时,超声温度60℃、超声时间30min、溶液浓度5%;发酵破壁法的最佳工艺条件为:酵母液浓度10%、酵母液加入量1ml、培养时间4天。这三种方法的破壁率分别为:微波法85.53%,温差--超声波法88.53%,发酵法77.63%。
其次,进行了花粉中黄酮类物质的提取工艺研究。以黄酮得率为指标,分别采用了水浴回流法、冷浸法、超声波法和索氏提取法对花粉中的黄酮类物质进行提取,系统的研究了各因素对黄酮得率的影响。此部分实验采用单因素实验和响应面分析法对花粉中黄酮类物质的提取工艺进行优化。结果表明,水浴回流法的最佳提取条件为:料液比1:14,乙醇浓度87%,提取次数3次;冷浸法的最佳提取条件为:乙醇浓度92%,料液比1:42,冷浸时间6d;超声波法的最佳提取条件为:乙醇浓度80%,料液比1:31,超声次数3次;索氏提取法的最佳提取条件:乙醇浓度95%,回流时间12h。上述几种提取方法的黄酮得率分别为:水浴回流法3.330%,冷浸法3.180%,超声波法3.249%,索氏提取法3.256%。
最后进行了花粉中黄酮类物质的纯化及产品鉴定。为得到纯度较高的花粉黄酮,本文对花粉中黄酮类物质的粗提液用大孔吸附树脂法进行纯化处理。试验比较了9种大孔树脂的吸附等性能,结果显示,LSA-20大孔树脂对花粉中黄酮类物质的吸附及解吸性能最好。花粉黄酮类物质的最佳纯化条件为:吸附流速2ml/min,上样液浓度0.310mg/ml,上柱量20ml,上柱液pH=5,加盐量6mg/ml,解吸剂浓度80%,解吸流速0.8ml/min。花粉中黄酮产品的纯度由31.7%提高到75.6%。
对LSA-20大孔树脂纯化的产品进行了鉴定,利用颜色反应、薄层层析及高效液相色谱对纯化产品中的黄酮类物质进行了鉴定,结果表明有芦丁存在。
本文通过对陕西产油菜蜂花粉进行基础研究,为进一步开发蜂产品,特别是蜂花粉产品在保健及功能性食品等方面的应用提供了理论依据。