论文部分内容阅读
目的:癫痫是一种常见的神经系统慢性疾病,由神经元突然异常放电所引起的短暂大脑功能失调的综合征,具有突然性、反复发作的特点。我国约有600万-700万癫痫患者。其中一部分癫痫患者是生育年龄的妇女,每年有0.3%-0.4%的新生儿来自患癫痫的母亲。在癫痫母亲所生孩子中2-6%出现发育迟缓,并且出现认知功能障碍的机率是正常母亲所生孩子的2-7倍。癫痫母亲所生子代的认知功能障碍越来越得到大家的重视,因此孕期母亲痫性发作对子代发育的影响备受关注。本文通过给予腹腔注射戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)慢性点燃Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠,将点燃成功的雌性大鼠与雄性SD大鼠合笼,雌性大鼠怀孕后继续腹腔注射戊四氮至孕20天,剖腹取出胎鼠观察活胎数、死胎数、吸收胎数,测量胎鼠体重身长,并用茜素红染色法对胎鼠骨骼进行染色以观察胎鼠骨骼发育情况。运用Western Blot观察胎鼠海马组织中bax,bcl-2及caspase-3蛋白表达变化。探讨母鼠孕期痫性发作对胚胎发育的影响及bax、bcl-2、capase-3在胎鼠海马中的表达变化。方法:通过每天给予腹腔注射PTZ建立慢性点燃癫痫模型。将雌性SD大鼠30只(7-8周,起始体重200±20g)随机分为正常对照组(NC组)、盐水组(NS组假处理组)和癫痫组(PTZ组)。其中NC组、NS组、PTZ组各10只。自实验第一天起,PTZ组大鼠每天上午9:00腹腔注射PTZ (35mg/kg),NS组同时腹腔注射相应剂量的生理盐水,NC组不做任何处理,每次注射后观察1h。按照Racine分级标准,连续3次获得Ⅳ级或Ⅳ级以上的运动性惊厥的大鼠为完全点燃,待癫痫组点燃成功后继续前处理一周,将三组雌性SD大鼠与雄性SD大鼠合笼,第二天观察阴栓,有阴栓者记孕0天,各组继续孕前处理至孕20天,腹腔注射水合氯醛麻醉孕鼠后剖腹取出胎鼠,在三组孕鼠中每组随机取6只孕鼠观察其胎鼠中的活胎数、死胎数、吸收胎数,称量活胎鼠体重,测量活胎鼠身长,用茜素红染色方法对胎鼠进行骨骼染色,观察胎鼠骨骼有无畸形及上枕骨、胸骨、椎骨的发育情况。每组剩余4只孕鼠所生的胎鼠运用Western Blot方法测定其海马组织中bax,bcl-2及caspase-3蛋白表达变化,实验中及时补充因癫痫发作死亡的大鼠。结果:1胎鼠形态学观察结果孕鼠怀孕第20天时剖腹取胎鼠观察活胎鼠比例,NS组活胎数比例(98.76%)与NC组(98.73%)相近(P>0.05),PTZ组活胎数比率(88.4%)较NC组和NS组明显降低(P<0.05);对胎鼠的形态观察,发现PTZ组有2只胎鼠均出现卷尾及四肢短肢外观畸形,而NC组及NS组未观察外观畸形胎鼠,但结果没有统计学意义;对三组活胎体重的比较,采用完全随机设计的方差分析,结果显示:NC组(4.31±0.20g)、NS组(4.41±0.31g)、PTZ组(4.37±0.26g)无明显差异(P>0.05)。对三组活胎身长比较,采用完全随机设计的方差分析方法分析,结果显示: NC组(3.71±0.17cm)、 NS组(3.72±0.12cm)、 PTZ组(3.70±0.157cm)无明显差异(P>0.05)。2胎鼠骨骼染色结果NC组、NS组及PTZ组活胎鼠的骨骼,没有发现明显异常,对胎鼠上枕骨及胸骨骨化程度的观察显示三组无明显差异(P>0.05);胎鼠椎骨染色显示,NC组与NS组椎骨出现双骨化点胎鼠数无明显差异(P>0.05),而PTZ组出现双骨化点胎鼠数较NC组和NS组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。3子鼠海马Western结果PTZ组子鼠海马caspase表达水平(2.57±0.08)较NC组(0.53±0.13)和NS组(0.60±0.17)明显升高(P<0.05),NC组和NS组之间比较无统计学意义(P>0.05)。PTZ组子鼠海马bax表达水平(3.24±0.32)较NC组(1.55±0.11)和NS组(1.76±0.17)明显升高(P<0.05),NC组和NS组之间比较无统计学意义(P>0.05)。PTZ组子鼠海马bcl-2表达水平(1.42±0.074)较NC组(2.45±0.07)和NS组(2.36±0.10)明显降低(P<0.05),NC组和NS组之间比较无统计学意义(P>0.05)。结论:1大鼠孕期痫性发作对其子代外观影响较小,而可能导致子代骨骼发育延迟。2孕期痫性发作使子鼠海马促凋亡蛋白bax表达增加,抑凋亡蛋白bcl-2表达降低,凋亡执行蛋白caspase-3表达增加,推测孕期痫性发作能海马神经元凋亡增加。