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目的:本研究采用水提醇沉法从罗勒中提取多糖,正交实验优选最佳提取工艺,酶法与Sevage法合用除蛋白,用H2O2脱色素,乙醇分级沉淀获得分级多糖,研究分级醇沉罗勒多糖刺激免疫细胞增殖能力和抑菌能力的活性。利用阴离子交换柱色谱法和凝胶柱色谱法对罗勒除蛋白后分级醇沉多糖进一步分离纯化,从而获得均一多糖;并针对均一多糖进行了结构分析和生物活性研究。方法:1.罗勒多糖的提取用水提醇沉法提取罗勒粗多糖,采用正交实验选择最优提取工艺,酶法与Sevage法联合使用除蛋白质,用H2O2脱色素,用不同浓度的乙醇对多糖进一步分级沉淀以获得分级醇沉多糖。采用苯酚-浓硫酸法对罗勒粗多糖及分级醇沉多糖进行多糖含量测定,考马斯亮蓝法测定罗勒多糖中蛋白质含量。2.罗勒多糖的分离纯化采用DEAE-52纤维素阴离子交换和Sephadax G-100凝胶过滤柱层析对80%醇沉罗勒多糖进行分离纯化,以期得到罗勒均一多糖（Ocimum basilicum L.polysaccharide,OBP）。3.OBP的结构分析采用高效凝胶渗透色谱法对OBP进行纯度检验和分子量测定,采用完全酸水解法和气相色谱法对OBP进行单糖组分分析。对OBP进行紫外光谱和红外光谱扫描,检验其是否有核酸和蛋白质残留并通过OBP的特征吸收峰确定其官能团。4.罗勒多糖的生物活性研究采用MTT法检测分级醇沉罗勒多糖刺激免疫细胞增殖能力和体外抗菌能力。通过细胞划痕实验检测OBP对非小细胞肺癌A549细胞株运动能力的影响,MTT法检测OBP对A549细胞增殖抑制作用、对小鼠脾脏细胞和巨噬细胞增殖的影响及体外抗菌作用。结果:1.由正交实验结果所得,当料液比为1:20,提取时间为2h,温度为90℃,提取3次,多糖提取率最高。500g罗勒药材经水提醇沉得到46g粗多糖,提取率为9.1%,苯酚硫酸法测得多糖含量为26.21%,考马斯亮蓝法测得蛋白质含量为33.73%。粗多糖采用酶法联合Sevage法除蛋白,脱色后分别用30%、50%、80%乙醇沉淀,得到6.05g、4.095g、3.64g分级醇沉多糖,得率分别为13.15%、8.9%、7.91%,此过程会有一部分多糖损失。分级醇沉多糖含量分别为27.5%、36.78%、19.11%。2.除蛋白、脱色后80%醇沉多糖经DEAE-纤维素离子交换和Sephadax凝胶过滤柱层析分离纯化得罗勒多糖纯品OBP。高效凝胶渗透色谱（HPGPC）法鉴定OBP为均一多糖组分,重均分子质量（M W）为15.751KDa。苯酚硫酸法测得多糖含量为95.6%。3.OBP经完全酸水解,气相色谱（GC）分析表明OBP由鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、阿洛糖、甘露糖、半乳糖组成,相对摩尔比为2.18:4.025:2.38:0.15:1.7:0.357。OBP在260nm和280nm均没有紫外吸收,说明OBP没有蛋白质和核酸污染。红外光谱扫描结果表明OBP具有多糖的特征吸收峰。4.30%醇沉多糖抑菌效果最佳,50%醇沉多糖促进脾脏细胞增殖作用最为显著,而30%醇沉多糖对巨噬细胞增殖的刺激作用最强。细胞划痕实验表明,不同浓度的OBP都对A549细胞的迁移有抑制作用,其中当药物达到400μg/mL时,抑制率最大。但是OBP对A549细胞增殖没有明显的抑制作用。OBP的浓度为250500μg/mL时,具有较好的促进脾脏细胞增殖作用。OBP对巨噬细胞的最佳刺激浓度为250μg/mL。各检测菌中,OBP对铜绿假单胞菌ATCC27853没有抑制作用,对普通变形杆菌ATCC49027和金黄色葡萄球菌ATCC6538的抑菌效果最为显著MIC为2.5mg/mL,对藤黄微球菌ATCC10240、粪肠球菌ATCC29212、表皮葡萄球菌ATCC12228、肺炎克雷伯菌ATCC13882、MRSA 1和MRSA 2的MIC较弱均为5.0mg/mL。但是OBP仅能抑制菌株的生长,不能杀死各菌株。结论:1.本研究采用水提醇沉法提取多糖,该法条件温和,操作简单,提取效率高。酶水解法联合温和的Sevage法除蛋白,先用胰蛋白酶将糖蛋白水解并将大分子蛋白质水解成小分子,后用Sevage法去除蛋白质,条件温和,除蛋白效率高,且不易破坏多糖结构。H2O2脱色素多糖损失率低。用分级醇沉初步达到分离多糖的目的,将多糖划分成三个分子量范围不同的组分,操作简单,多糖损失率小,多次醇沉可以去除部分溶于乙醇的杂质,进一步纯化多糖[1,2]。2.由高效凝胶渗透色谱图观察,OBP峰型单一对称;从DEAE-52纤维素离子交换柱洗脱曲线看,OBP为蒸馏水洗脱组分;苯酚硫酸法测得OBP多糖含量达到95.6%。推测OBP为均一中性多糖,分子量为15.751KDa。3.OBP不含蛋白质和核酸,是由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、阿洛糖、甘露糖、半乳糖组成的均一杂多糖。4.罗勒多糖中的大分子成分可能具有相对较好的抑菌活性,对巨噬细胞的增殖也有较好的促进;但在刺激脾脏细胞方面,罗勒多糖所含中等大小成分可能有更好的效果。OBP具有良好的抗肿瘤转移作用,但是不能直接杀死肿瘤细胞。OBP能促进免疫细胞增殖,对细菌的生长具有一定的抑制作用,但是不能杀死细菌。