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植物胁迫应答基因的转录调控是植物应答各种胁迫的重要环节。近几年的研究表明转录因子在植物胁迫应答反应中起着重要的作用。ERF转录因子是一个植物特有的转录因子基因家族,它们都含有一个DNA结合域(ERF domain),调节着植物对激素(乙烯)、病原、低温、干旱及高盐等的分子应答反应。因此ERF转录因子的深入研究有助于理解植物胁迫应答的分子机理,同时可以为植物抗逆分子育种提供有效的新策略。 本实验室以GCC-box为bait,利用酵母单杂交系统从番茄cDNA表达文库中筛选到4个新基因,它们都编码ERF domain。因为它们既可以与乙烯应答元件结合,又可以与茉莉素应答元件结合,因此命名为JERF1/2/3/4(Jasmonate and ethyleneresponsive element binding factors)。 在此基础之上,本研究首先在酵母体内分析了JERFs的转录激活特性。JERFs的ORFs分别与LexA的DNA结合域编码序列融合构建成表达载体。所构建的表达载体分别转化含有报告载体p80p-lacZ的EGY48酵母细胞。β-半乳糖苷酶滤纸印迹分析显示JERFs能够激活报告基因LacZ的表达,说明JERFs在酵母中能起转录激活因子的作用。 同时对JERFs的诱导表达特性进行了分析。分别用乙烯、MeJA、ABA、NaCl和低温处理番茄幼苗,Northern杂交分析,发现JERFs均被诱导表达,但各自表达时间和表达量有所不同,说明它们可能参与上述胁迫应答反应,但所起的作用有所差异。以番茄gDNA为模板,通过PCR扩增到4个其启动子中含有GCC-box的基因ChiB、GluB、NP24和PR1b1的外显子片段。以它们为探针,Northern杂交分析乙烯处理过的番茄幼苗,发现ChiB、GluB和NP24也被诱导表达,但表达时间明显滞后于JERFs。这说明在外源ET诱导的信号转导途径中,JERFs可能通过与GCC-box的互作,调控相关基因的表达。而SA对JERFs的表达没有明显的诱导作用,但是能够明显抑制GluB和NP24的表达。说明外源SA激活的信号途径可能通过阻碍JERFs蛋白的合成或者改变JERFs蛋白的活性来抑制其对具有GCC-box的基因表达的激活作用。 与其他同学合作,在JERFs转基因烟草中进一步分析了JERFs所调控的基因。以烟草gDNA为模板,通过PCR扩增到4个其启动子中含有GCC-box的CHN50、GLA、Osmotin和prb-1b基因的片段。Northern杂交分析发现JERF2的超表达能够提高正常生长条件下烟草中 GLA和 Osmotin基因的表达。 上述结果表明,JERFs能够应答于外界逆境信号,通过与GCC七OX互作,激活相关下游基因的表达。