第一部分TR4在肝细胞性肝癌及其癌旁组织中的表达目的观察睾丸孤核受体4(TR4)在肝癌组织及癌旁肝组织中的分布,初步探讨TR4在肝细胞性肝癌发生中的作用。方法采用免疫组织化学的方法,检测71例临床肝细胞性肝癌及其癌旁肝组织标本,研究TR4在肝癌及癌旁肝组织细胞中的分布情况,同时比较两者TR4分布的差异。结果在肝癌组织细胞浆中,TR4主要呈弱阳性表达,占总病例数的64.8%,其次为中等阳性表达,占总病例数的35.2%；在肝脏组织细胞浆中,TR4绝大多数呈现强阳性及中等阳性表达,分别占总病例数的49.2%和42.3%,其次为弱阳性表达,占总病例数的8.5%,两组之间存在显著性差异(P<0.01)。在肝癌组织细胞核中,TR4阳性表达占绝大多数(包括弱阳性占52.1%、中等阳性占14.1%、强阳性7.0%),阴性表达者仅占总病例数的26.8%；而在肝脏组织细胞核中,TR4主要为阴性表达,占总病例数的73.2%,其次为弱阳性表达,占总病例数的26.8%,两组之间存在显著性差异(P<0.01)。结论TR4在肝癌组织及肝旁肝组织中存在差异表达,提示TR4在肝癌的发生过程中可能起某种调控作用。第二部分TR4对肝细胞性肝癌增殖能力的影响目的研究TR4对肝细胞性肝癌增殖能力的影响。方法运用慢病毒载体系统,在肝癌细胞系HCC-LM3及Huh7中构建TR4敲减及过表达稳转细胞系。通过MTS法细胞增殖实验,分别检测TR4敲减以及TR4过表达对细胞增殖能力的影响。同时,构建裸鼠皮下成瘤模型,在动物体内研究HCC-LM3细胞在TR4敲减及过表达时对肿瘤增殖能力的影响。结果运用慢病毒载体系统,成功在HCC-LM3及Huh7细胞中构建了TR4敲减及过表达稳转细胞系,并通过Real-time PCR和Western Blot方法进行验证。MTS法细胞增殖实验显示,TR4敲减或过表达后对HCC-LM3及Huh7细胞的增殖能力均无影响。在裸鼠皮下成瘤模型中,将TR4敲减或过表达的HCC-LM3细胞与其对照组细胞接种到裸鼠皮下,观察42天后,实验组和对照组裸鼠均成瘤,TR4敲减或过表达时裸鼠皮下肿瘤的体积与重量与其对照组相比均无明显差异。结论TR4对肝细胞性肝癌的增殖能力没有影响。第三部分TR4对肝细胞性肝癌侵袭转移能力的影响目的研究TR4对肝细胞性肝癌侵袭转移能力的影响。方法运用慢病毒载体系统,在肝癌细胞系HCC-LM3及Huh7中构建TR4敲减以及TR4过表达稳转细胞系。通过细胞迁移及细胞侵袭实验,分别检测TR4敲减或过表达对细胞迁移/侵袭能力的影响。同时,构建荧光素酶标记的TR4敲减人肝癌细胞系LM3-luc-shTR4及其对照组细胞系LM3-luc-scr,通过外科手术的方式将上述两组细胞分别接种到3只裸鼠肝脏中,通过小动物活体成像系统检测肿瘤生长及转移情况,在动物体内研究TR4对肝癌侵袭转移能力的影响。结果运用慢病毒载体系统,成功在HCC-LM3及Huh7细胞中构建了TR4敲减及过表达稳转细胞系,并通过Real-time PCR和Western Blot方法进行验证。细胞迁移及细胞侵袭实验显示,TR4敲减后可促进HCC-LM3及Huh7的迁移及侵袭能力,而TR4过表达后HCC-LM3及Huh7的迁移及侵袭能力受到抑制。将荧光素酶标记的TR4敲减人肝癌细胞系LM3-luc-shTR4及其对照组细胞系LM3-luc-scr通过外科手术的方式原位种植到裸鼠肝脏中,在术后第42天观察到两组中的所有裸鼠均发生肝内成瘤,LM3-luc-shTR4组3只裸鼠中有2只发现肿瘤转移,而LM3-luc-scr组3只裸鼠均未观察到肿瘤转移。结论TR4可抑制肝细胞性肝癌的侵袭转移能力。