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猪圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)属于圆环病毒科,圆环病毒属,无囊膜,直径约17nm,其基因组为一单链环状DNA。是最小的动物病毒之一。根据PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列,PCV可分为PCV1和PCV2两个型,PCV1对猪为非致病性的,但是PCV2与猪的很多疾病综合征有关,统称为猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease, PCVD),以断奶仔猪多系统衰竭综合症(Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS)最为常见,主要感染7-15周龄仔猪,临床症状包括消瘦、呼吸困难、腹泻、可视粘膜苍白、也会伴发皮炎,剖检可见淋巴结肿胀,肾脏损伤,具有高死亡率。本研究的主要目的是：(1)在全基因组水平分析浙江地区猪圆环病毒2型的流行毒株的分子特征；(2)应用双报告基因以及荧光定量检测法,建立研究TLRs通路的技术体系；(3)初步探索猪圆环病毒2型基因组中影响Toll样受体传导通路的核酸片段。1.本研究应用PCR方法对2008-2009年99份疑似病猪脾脏、肺脏、淋巴结混合组织样本进行PCV2检测,并以组织DNA为模板进行PCV2的全基因组扩增,克隆后进行测序。结果显示,2008与2009年浙江地区PCV2的平均阳性率47.5%,与往年相比基本持平。随机选取18份阳性病料进行PCV2全基因组测序分析,18个毒株均属于Group1,其中5个毒株(27.8%)属于1A分支,3个毒株(16.7%)属于1B分支,9个毒株(50%)属于1C分支。可见Group1依然是浙江地区PCV2的主导基因型,随着PCV2的流行,1C分支从无到有,并逐渐占据主导地位,但该分支的致病性特征还有待进一步研究。2.为了建立与先天免疫相关的TLR通路研究平台,本研究利用TLRs的配体[Poly(I:C)、ODN1826]和胞内TLRs通路抑制剂[氯喹(Chloroquine,Chq)],运用双报告基因的相对荧光定量检测方法,通过分析NF-κB以及相关TLRsmRNA表达量的变化,建立研究TLRs通路的技术体系。50μg/mL Poly(I:C)与50μM ODN1826刺激RAW264.7后,细胞内NF-κB表达量分别比未刺激细胞增高238%与113%,差异极显著(P＜0.01)；相应TLR配体TLR3与TLR9的mRNA表达量是未刺激细胞的12.9与1.5倍,前者差异极显著(P＜0.01)。因此,利用双报告基因以及相对荧光定量检测方法研究TLRs通路是可行的。利用此方法初步研究了PCV2基因组中影响TLRs通路的核酸片段,结果表明ssDNA比dsDNA对NF-κB这一TLR通路上的关键分子影响更大。综上所述,本研究初步探明了浙江地区PCV2流行毒株的分子特征,建立了研究先天免疫相关的TLR通路技术平台,探讨了PCV2基因组对TLR通路的影响。为深入研究PCV2氨基酸变异与病毒致病性关系、PCV2感染与免疫特性奠定了良好基础。