消费者越来越关注食品添加剂与健康的关系。无防腐剂添加和化学物质处理的自然、传统的食物备受青睐。生物防腐已经成为了未来食品防腐的趋势，天然抗菌肽，因其天然、安全，受到研究者的瞩目。传统方法筛选抗菌肽存在工作量大、耗时较长、敏感性低的缺点。为弥补传统筛选方法的不足，急需建立新型抗菌肽筛选方法。本课题组已经初步建立了基因筛选方法，检测和筛选了传统发酵食品中的大量乳酸菌，获得了1株产抗菌肽菌株。经传统方法证实，具有抑菌效果。表明该方法具有一定的可行性。但是该方法仍存在着不足，缺乏高通量筛选的特质。本研究在初步PCR方法筛选的基础上，对Ⅱa型抗菌肽的PCR筛选方法进一步优化，拟提高筛选效率；并且比较种属特异性引物筛选与简并引物筛选方法的优劣，建立高效的筛选方法，进而为建立抗菌肽产生菌的高通量筛选模型奠定基础。本研究首先建立和优化了发酵乳中宏基因DNA提取方法，并提取12份马奶发酵乳的宏基因组DNA，用于初步筛选抗菌肽基因。此方法省去了事先筛选菌株的繁重工作，提高了抗菌肽筛选的效率。对3份阳性马奶发酵乳样品进行乳酸菌的分离和纯化，共获得118株乳酸菌。采用菌落PCR方法筛选乳酸菌，最终筛选获得了3株具有抗菌肽基因的菌株。经过传统抑菌实验验证，上述3株乳酸菌对李斯特菌均具有明显的抑菌效果。以其中抑菌效果较好的菌株C71基因组DNA为模板，分别扩增了完整的抗菌肽基因和成熟的抗菌肽基因，构建于表达载体pCold-SUMO上，获得了4种重组质粒。在嗜冷的大肠杆菌中，成功表达了抗菌肽基因。本研究优化了诱导表达的条件，确定了最佳的诱导时间为8h和最适IPTG浓度为0.2mmol/L。研究表明抗菌肽的前导肽对其抗菌活性无明显影响。本实验研究了煮沸法、裂解液溶解法、超声破碎法三种方法破碎细胞的效果。其中超声破碎法破碎菌体彻底，并且最大限度的保护了抗菌肽的完整性和活性。双层牛津杯抑菌试验结果表明，超声波破碎菌体获得的上清抑制李斯特菌效果明显。以上结果表明抗菌肽基因成功表达。与原始乳酸菌相比，原核表达的抗菌肽表达量显著提高，具有一定的应用的潜力。