【目的】研究茯苓菌液态发酵合成三萜的过程,通过最佳调控金属离子及条件筛选、培养基优化、转录组分析优选出最佳液态发酵培养条件。【方法】1.最佳调控条件研究:以菌丝体干重及茯苓三萜含量为考察指标,优选出最佳调控金属离子、最佳浓度、最佳添加时间。2.培养基优化研究:在最佳调控条件的基础上,使用Box-Benhnken试验设计得出最佳培养基配比。3.转录组分析研究:通过转录组测序,分析锌离子调节茯苓代谢的机制,找出锌离子调控茯苓三萜合成的核心位点。【结果】1.在发酵48h时加入200μmol/L ZnSO₄时茯苓菌在液态发酵体系中细胞生长与三萜类合成能得到最好的促进作用,结果为DCW2.99g/L、三萜27.22mg/L。2.通过采用Box-Benhnken试验设计对茯苓三萜发酵培养基进行四因素三水平的响应面分析,得出最佳培养基配方:葡萄糖浓度为25.81g/L、酵母浸膏浓度为9.90g/L、硝酸钾浓度为7.50g/L、硫酸锌浓度为265.43μmol/L。该最优条件下茯苓三萜的产量为31.37±2.29mg/L。3.通过转录组测序分析,得出5个关键基因参与萜类代谢调控,其蛋白分别为萜烯合成酶（存在金属离子结合结构域）、聚丙烯合成酶、α/β水解酶类、柠檬酸转移蛋白,且TRINITY_DN7529_c0_g1编码的萜烯合成酶和TRINITY_DN10849_c0_g1编码的α/β水解酶在接受锌离子调控后表达水平显著上调,尤其是TRINITY_DN7529_c0_g1编码的萜烯合成酶,因其含有金属离子结合结构域,推测该基因为锌离子调控茯苓三萜合成的核心位点。【结论】采用锌离子调控茯苓菌液态发酵生产茯苓三萜的方法合理、可行。通过培养条件优化,可大幅度提高茯苓三萜的产量。